【摘 要】
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CRISPR-Cas9作为一种新兴的,能够对靶向序列进行精准修饰的基因编辑系统,它的出现革新了生物学领域,促进了当前医学、遗传学、胚胎学、生物信息学和病理学的研究发展。借助CRISPR/Cas9系统我们可以实现靶向基因的敲除或外源碱基插入。与ZFN和TALEN基因编辑技术相比,CRISPR/Cas9系统具有成本低,易操作的优势,因此其在植物育种、畜牧改良和生物医学工程等研究中都起到了重要的作用。但
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CRISPR-Cas9作为一种新兴的,能够对靶向序列进行精准修饰的基因编辑系统,它的出现革新了生物学领域,促进了当前医学、遗传学、胚胎学、生物信息学和病理学的研究发展。借助CRISPR/Cas9系统我们可以实现靶向基因的敲除或外源碱基插入。与ZFN和TALEN基因编辑技术相比,CRISPR/Cas9系统具有成本低,易操作的优势,因此其在植物育种、畜牧改良和生物医学工程等研究中都起到了重要的作用。但受限于Cas9蛋白的大小,该系统在实际应用中常因为递送效率低而影响编辑效果。内源表达Cas9的细胞系和动物模型避免了Cas9蛋白的递送,仅需sg RNA的表达即可完成体内或体外的基因编辑,因此极大地简化了使用步骤及拓展了该系统在动物体内的应用。但到目前为止,表达Cas9的细胞系及动物模型大多为在小鼠上的工作,在更多模式生物或大型动物中仅有较少研究。非人灵长类与人类在遗传背景上的极高相似性,使之成为生命科学研究中的重要材料,在疾病机制研究、药物开发等工作中起着无可替代的作用。因此在非人灵长类中高效地应用基因编辑技术,能够极大的促进生物医学研究的发展。在本研究中,我们通过获得稳定表达Cas9-GFP的慢病毒,介导了Cas9猕猴成纤维细胞系的产生,并证明该细胞系可方便、高效地完成细胞中的靶向序列编辑。并且试图建立表达Cas9的猕猴模型,以克服与Cas9相关的递送困难,希望为研究生物学过程和疾病提供有吸引力的模型。尽管得到的猕猴模型在基因组水平上产生了Cas9序列的插入,但未能很好的表现出理想的功能,我们也针对该情况做出了解释,希望能为以后的Cas9模型动物构建工作提供一定的指导与建议。
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