【摘 要】
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背景:乳杆菌（Lactobacillus）是广泛存在于自然界的一个菌属,目前共发现145种。一些乳杆菌可作为益生菌用于根除幽门螺杆菌和缓解胃黏膜炎症等治疗。但近年来,分子菌群分析的研究发现,多种乳杆菌在胃癌患者胃黏膜中显著富集,提示其与胃癌具有相关性。此外,乳杆菌与炎症性疾病的发生也密切相关。但目前定植于胃黏膜的乳杆菌尚不能明确是否具有致病性和益生特性。目的:本研究旨在分析多种人胃源性乳杆菌的致病
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背景:乳杆菌（Lactobacillus）是广泛存在于自然界的一个菌属,目前共发现145种。一些乳杆菌可作为益生菌用于根除幽门螺杆菌和缓解胃黏膜炎症等治疗。但近年来,分子菌群分析的研究发现,多种乳杆菌在胃癌患者胃黏膜中显著富集,提示其与胃癌具有相关性。此外,乳杆菌与炎症性疾病的发生也密切相关。但目前定植于胃黏膜的乳杆菌尚不能明确是否具有致病性和益生特性。目的:本研究旨在分析多种人胃源性乳杆菌的致病性和抑制Hp特性。方法:选取分离自人胃黏膜的11种乳杆菌,每种乳杆菌选取1株细菌,分别为:敏捷乳杆菌CP10、卷曲乳杆菌B118、发酵乳杆菌B110、黏膜乳杆菌B125、口乳杆菌H1674、副干酪乳杆菌5B27、植物乳杆菌CP8S-b、罗伊氏乳杆菌B046-a、鼠李糖乳杆菌B071-d、唾液乳杆菌5B15、阴道乳杆菌H154-lac10。采用HEp-2上皮细胞系和AGS上皮细胞系建立体外上皮细胞乳杆菌感染模型,通过姬姆萨染色法和细菌定量培养法定性和定量分析乳杆菌黏附性;通过乳酸脱氢酶（LDH）测定法评估乳杆菌感染上皮细胞后的毒性作用;通过K-B纸片扩散法检测乳杆菌抑制幽门螺杆菌效应;分析具有致病潜力的细菌的存在对慢性胃炎程度及活动度的影响。结果:1.利用体外上皮细胞乳杆菌感染模型观察到,11种人胃源性乳杆菌中的9种乳杆菌（9/11）的细胞爬片有细菌紧密的黏附在HEp-2上皮细胞和AGS上皮细胞表面,提示9种乳杆菌具有黏附性。依据细菌定量培养结果,9种乳杆菌对AGS上皮细胞系的黏附性由高到低依次为唾液乳杆菌5B15、鼠李糖乳杆菌B071-d、黏膜乳杆菌B125、罗伊氏乳杆菌B046-a、敏捷乳杆菌CP10、阴道乳杆菌H154-lac10、植物乳杆菌CP8S-b、副干酪乳杆菌5B27、发酵乳杆菌B110。唾液乳杆菌5B15的黏附指数达22.33±3.93 CFU/cell,约为发酵乳杆菌B110黏附指数的3倍。以上结果提示11种人胃源性乳杆菌的黏附性存在菌种间差异,其中9种乳杆菌具有定植于胃黏膜的潜力。2.利用体外上皮细胞乳杆菌感染模型评价细胞毒性发现,11种人胃源性乳杆菌中5种乳杆菌（5/11）的LDH相对释放量明显高于对照组,提示5种乳杆菌具有细胞毒性。依据LDH相对释放量,5种乳杆菌对AGS上皮细胞系毒性作用由强到弱依次为罗伊氏乳杆菌B046-a、唾液乳杆菌5B15、发酵乳杆菌B110、敏捷乳杆菌CP10、口乳杆菌H1674。罗伊氏乳杆菌B046-a的LDH相对释放量达6.75±0.12,约为口乳杆菌H1674的LDH相对释放量的3倍。以上结果提示,11种人胃源性乳杆菌的细胞毒性存在菌种间差异,其中5种乳杆菌具有损伤胃黏膜的潜力。因此,敏捷乳杆菌CP10、发酵乳杆菌B110、罗伊氏乳杆菌B046-a、唾液乳杆菌5B15具有黏附到胃上皮细胞的能力,并能产生细胞毒性作用,是有致病潜力的细菌。3.体外抑制Hp作用分析发现,卷曲乳杆菌B118、口乳杆菌H1674、罗伊氏乳杆菌B046-a上清液的抑菌直径为8.0mm,与阴性对照相比无明显差异。敏捷乳杆菌CP10、发酵乳杆菌B110、黏膜乳杆菌B125、副干酪乳杆菌5B27、植物乳杆菌CP8S-b、鼠李糖乳杆菌B071-d、唾液乳杆菌5B15,阴道乳杆菌H154-lac10无明显抑菌圈产生。该结果提示11种乳杆菌上清液均不能抑制Hp生长,表明这些乳杆菌不具备抑制幽门螺杆菌的能力。4.76例Hp阴性的慢性胃炎患者胃黏膜样本中,在13例胃黏膜样本中发现具有致病潜力的乳杆菌（包括敏捷乳杆菌CP10、发酵乳杆菌B110、罗伊氏乳杆菌B046-a、唾液乳杆菌5B15）,总检出率为17.1%（13/76）。统计分析发现,这些样本胃黏膜的胃炎程度和活动度平均分与未发现致病潜力乳杆菌的胃黏膜的相比,差异无统计学意义（1.62±0.74 vs 1.6±0.68,0.62±0.62 vs 0.65±0.57,p值均大于0.05）。提示具有致病潜力的乳杆菌的存在对胃黏膜胃炎程度和活动度无显著影响。结论:敏捷乳杆菌、发酵乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌能够黏附胃上皮细胞,并具有细胞毒性作用,对幽门螺杆菌无抑制效应,是具有致病潜力的乳杆菌,可能参与胃部疾病的发生。
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