禽流感（Avian Influenza）是由正黏病毒科、流感病毒属、A型流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的感染和/或疾病综合征。此病呈世界性流行，给养禽业造成巨大的经济损失。血凝素蛋白（HA）是禽流感病毒最重要的结构蛋白，占囊膜蛋白的90％，是诱导体液免疫的主要靶抗原，并且还能诱导细胞毒性T细胞作用，另外HA各部分的抗原性和免疫原性也有差别，研究表明，HA上游基因的免疫原性以及抗原性强于下游。　　 本研究利用RT-PCR技术扩增和克隆了H5N1亚型禽流感病毒的上游（HAf）和中游（HAm）基因。将HAf和HAm基因片段与原核表达载体pET-32a连接，利用E.coli DH5α感受态细胞进行克隆和扩增，经PCR鉴定，证明成功构建了融合表达质粒32a-HAf和32a-HAm。将构建好的融合表达质粒转化到E.coli Rosetta感受态细胞中，在1mmol/L的IPTG诱导下，HAf基因得到了可溶性表达，分子量为40kD，HAm基因的表达产物则以包涵体形式存在，大小为56kD。　　 本研究为了使HAm的包涵体能够得到有效的利用，对包涵体进行了变性处理，变性后采用梯度透析复性。在透析缓冲液的浸泡下，4℃进行梯度复性，每12h换液一次。SDS-PAGE电泳表明包涵体复性效果良好。　　 复性后HAm蛋白与HAf可溶性蛋白分别经Ni-HTA亲和层析柱进行纯化处理，分离目的蛋白。经Western-blot免疫印记分析，HAf和HAm融合蛋白与H5亚型AIV阳性血清发生了特异性反应，但HAf重组蛋白的抗原性不强，而HAm重组蛋白具有良好的抗原性。　　 本研究为了以后进一步试验作准备，将纯化后的HAm重组蛋白作为包被抗原包被酶标板，通过方阵滴定法初步建立了检测禽流感病毒H5亚型阳性血清的间接ELISA方法，结果抗原最佳包被浓度为25μg/ml，血清最佳稀释度为1:160。通过特异性试验证明得到的重组蛋白具有较好的型特异性。　　 本研究通过克隆和转化，分别得到了HA不同片段的可溶性表达和包涵体表达，并通过尿素的变性复性处理和Ni柱纯化操作得到了比较纯的目的蛋白，证明这种表达方法可行，为抗原性和特异性研究奠定了基础，为进一步摸索HA部分基因的可溶性表达方法提供了一定的依据。