锌诱导的金属硫蛋白对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护

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第一部分:大鼠肝移植模型的构建目的:寻找并建立一种稳定的大鼠肝移植模型。方法:采用改良二袖套法吻合血管,在供肝的灌注、取肝、肝上下腔静脉的吻合、围手术期处理等方面进行改进,共施行大鼠原位肝移植实验100例,观察术后并发症及存活率。结果:经过100例次的训练,建立了稳定的大鼠肝移植模型,手术成功率94%,两周存活率90%,无肝期15.4±2.0分钟,受体手术时间45.4±5.0分钟。结论:改良二袖套法大鼠肝移植术具有远期生存率高,并发症少的优点,是一种可靠稳定的大鼠肝移植模型。第二部分:锌诱导的金属硫蛋白对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用目的:探讨锌诱导大鼠肝脏产生金属硫蛋白,并对移植肝缺血再灌注损伤起保护作用的机制。方法:雄性SD大鼠200~250克,共24只,配成12对,受体略重于供体,随机分成2组:实验组和对照组。术前连续3天给供体大鼠腹腔注射5mg/kg ZnSO4·7H2O,最后一次于缺血前12小时给予;对照组则用不含ZnSO4·7H2O同等剂量的生理盐水同时间腹腔注射。然后使用改良二袖套法行大鼠原位肝移植术。门静脉复流六小时后,进腹观测两组供肝胆汁分泌情况,检测血清中AST、ALT、LDH水平,取肝脏组织,电镜下观察肝组织的超微结构,流式细胞仪分析肝细胞的凋亡百分比,TUNEL法检测肝细胞的凋亡情况,免疫组化法检测TNF-α的表达,同时检测两组肝脏中硫蛋白的含量,测定NO、T-AOC、MDA的含量。对实验结果所采集数据采用均数±标准差,应用成组t检验法,采用统计软件SPSS11.5进行统计分析。结果:实验组胆汁分泌量显著多于对照组,而AST、ALT、LDH水平显著低于对照组。实验组肝脏中硫蛋白量明显高于对照组肝脏中硫蛋白的含量。HE染色实验组肝细胞损伤显著轻于对照组。流式细胞仪分析实验组凋亡百分比显著低于对照组。TUNEL法检测显示实验组凋亡显著少于对照组。免疫组化显示对照组TNF-α免疫组化染色阳性明显多于实验组,同时实验组MT、NO、T-AOC含量明显高于对照组,MDA的含量明显低于对照组。结论:锌对大鼠肝移植模型缺血再灌注损伤具有较强的保护作用,其机制之一可能是通过诱导肝脏金属硫蛋白的产生,从而在清除自由基抗氧化、保护细胞膜、抑制细胞凋亡等方面对移植肝的缺血再灌注发挥保护作用。
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