【摘 要】
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目的:通过病毒注射的方法敲降海马DG区NALCN的表达,评价海马DG区NALCN是否参与认知功能及情绪的调控。方法:将48只成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组（CTL组）和实验组（KO组）,每组各24只。1.首先通过免疫荧光染色（NALCN与Neu N共标记）验证WT组小鼠海马DG区是否有NALCN表达;2.CTL组和KO组小鼠分别于海马DG区注射等量且滴度一致的敲低NALCN表达的腺相关
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目的:通过病毒注射的方法敲降海马DG区NALCN的表达,评价海马DG区NALCN是否参与认知功能及情绪的调控。方法:将48只成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组（CTL组）和实验组（KO组）,每组各24只。1.首先通过免疫荧光染色（NALCN与Neu N共标记）验证WT组小鼠海马DG区是否有NALCN表达;2.CTL组和KO组小鼠分别于海马DG区注射等量且滴度一致的敲低NALCN表达的腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）及对照AAV。3.AAV注射21天后开始行为学实验,依次进行Y迷宫、三箱社交、旷场、高架十字迷宫、悬尾实验、强迫游泳实验,评估敲降海马DG区NALCN表达后对小鼠空间记忆、社交能力、社交记忆、运动能力以及焦虑抑郁情绪的影响。4.行为学测试结束后,利用免疫荧光技术验证病毒注射位置是否准确,利用RT-PCR和western blot技术验证海马DG区NALCN的敲除率。结果:1.免疫荧光证实NALCN在小鼠海马DG区广泛表达。2.与CTL组相比,KO组小鼠在Y迷宫实验中进入新臂次数和新臂停留时间明显缩短（P＜0.05）。这提示敲降小鼠海马DG区NALCN表达可能导致小鼠的空间记忆能力下降。3.在三箱社交实验中,第一部分社交能力测试,两组小鼠进入stranger 1小鼠所在侧室的时间及与stranger 1小鼠的互动时间没有差异;但第二部分社交偏好测试,CTL组小鼠在stranger 2小鼠所在侧室的探索时间及与stranger 2小鼠的互动时间明显多于在stranger 1小鼠所在侧室的探索时间及与stranger 1小鼠的互动时间（P＜0.05）,而KO组小鼠与之相反。这提示敲降小鼠海马DG区NALCN不影响小鼠的社交能力,但可能导致小鼠的社交记忆功能出现下降。4.与CTL组相比,KO组小鼠在旷场实验中的运动路程及平均速度无明显统计学差异。提示敲降海马DG区NALCN表达可能不影响小鼠的运动能力。5.与CTL组相比,KO组小鼠在旷场实验中探索中央区的时间没有统计学差异;高架十字迷宫实验中,KO组小鼠进入开臂和在开臂的探索时间、进入闭臂和在闭臂的停留时间没有明显的差异。这表明敲降海马DG区NALCN表达可能不影响小鼠的焦虑样情绪。6.与CTL组相比,在悬尾实验、强迫游泳实验中,KO组小鼠在强迫游泳实验和悬尾实验中的不动时间没有明显的差异。这提示敲降海马DG区NALCN表达可能不影响小鼠的抑郁样情绪。7.免疫荧光证实小鼠海马DG区病毒注射位置准确。8.与CTL组相比,NALCN在KO组小鼠海马DG区的表达显著下降（P＜0.05）。结论:海马DG区NALCN离子通道参与小鼠认知功能的调控,敲降海马DG区NALCN离子通道的表达会导致小鼠出现空间记忆和社交记忆障碍,但不会导致小鼠出现焦虑、抑郁等情绪异常。
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