盆腔器官脱垂（Pelvic Organ Prolapse,POP）是由于盆底支持结构薄弱而导致盆腔器官位置和功能异常的一类妇科疾病。其发病机制复杂,既往研究发现,盆底支持结构的损伤与细胞外基质的重构关系密切。作为细胞外基质Fibulin蛋白家族的一员,FBLN5（fibulin-5）能够促进内皮细胞黏附,在弹性纤维组装及弹性生成等生物学过程中扮演重要角色。FBLN5已被证实在多种疾病的发生发展中发挥关键作用,敲除大鼠FBLN5基因可以诱发其POP症状,近期的一项动物实验亦表明FBLN5在POP中发挥保护作用,但其具体作用机制尚未阐明。目的采用生物信息学技术预测FBLN5下游因子,提取人子宫骶韧带成纤维细胞（human uterosacral ligament fibroblast,h USLF）进行机械牵张建立机械应变模型,通过改变h USLF中FBLN5及下游因子的表达水平,检测细胞骨架变化、细胞内ROS水平、细胞衰老和细胞凋亡,探讨FBLN5对机械牵张刺激下h USLF损伤的调节作用,为进一步了解POP发病机制提供实验基础及理论依据。材料与方法1.通过生物信息学数据库GEO、Path Cards、JASPAR和Star Base等筛选FBLN5下游因子,双荧光素酶报告实验及染色质免疫共沉淀法验证因子间的调控关系。2.收集POP患者与非POP患者宫骶韧带组织,利用RT-qPCR和IHC检测并对比两组标本组织中FBLN5及下游因子表达的差异。3.提取原代hUSLF,分别以LV5-GFP和p SIH1-H1-copGFP作为慢病毒基因过表达和基因沉默载体,通过慢病毒转染细胞干预hUSLF中各因子的表达水平。利用四点弯曲装置对处理后的h USLF进行机械牵张刺激构建机械应变模型,鬼笔环肽荧光染色检测细胞骨架变化,ROS试剂盒检测细胞内ROS水平,流式细胞术检测细胞凋亡,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,RT-q PCR检测施加机械牵引后细胞内各因子的表达水平。结果1.生物信息学分析结果显示FBLN5可能的下游因子FOSL1、miR-222、Meis1和COL3A1。双荧光素酶报告实验检测分析和染色质免疫共沉淀结果显示FOSL1和Meis1能够分别通过与mi R-222和COL3A1启动子区域结合,促进mi R-222、COL3A1的表达;而mi R-222可以直接靶向抑制Meis1的表达。2.RT-qPCR和IHC结果显示,相较于对照组,POP患者宫骶韧带组织中FBLN5、Meis1和COL3A1表达水平降低,FOSL1和miR-222表达水平升高。3.细胞实验结果表明:FBLN5在盆腔器官脱垂中显著低表达;过表达FBLN5通过抑制FOSL1表达从而缓解机械牵引造成的h USLFs细胞损伤;FOSL1通过上调miR-222从而抑制MEIS1表达进而促进机械牵引造成的h USLFs细胞损伤;MEIS1可通过促进COL3A1转录从而缓解机械牵引造成的h USLFs细胞损伤。结论FBLN5能够通过抑制FOSL1介导的miR-222转录,上调Meis1表达进而促进COL3A1转录翻译,有效减轻机械牵张刺激对h USLF造成的损伤,缓解POP的发生。