【摘 要】
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异戊烯基化吲哚生物碱(prenylated indole alkaloids,简称PIA)广泛存在于麦角菌、青霉菌和曲霉菌中,具有一定的药理学活性,但其天然产量低且不易分离。异戊烯基转移酶(prenyltransf
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异戊烯基化吲哚生物碱(prenylated indole alkaloids,简称PIA)广泛存在于麦角菌、青霉菌和曲霉菌中,具有一定的药理学活性,但其天然产量低且不易分离。异戊烯基转移酶(prenyltransferase)可催化异戊烯基连接到不同的化合物上,是PIA生物合成途径中的一个关键酶。构效关系研究表明,异戊烯基化与否直接影响着PIA的生物活性。因此,研究异戊烯基转移酶及其编码基因,不仅有助于了解该酶的特性,阐明吲哚类生物碱异戊烯基化的分子作用机制,还能够为利用酶法合成获取具有潜在药用价值的PIA提供必要的工具。 目的: 探索黑曲霉( Aspergillus niger)全基因组中一个可能编码异戊烯基转移酶的An13g01840基因的功能。 方法: 本论文实验以黑曲霉gDNA为模板,通过PCR技术扩增An13g01840基因,利用QuikChang定点突变方法切除内含子序列获得目的基因的完整编码区,分别亚克隆到大肠杆菌(Escherich coli)表达载体 pET28a、pQE-60及酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)穿梭表达载体pESC-URA中以构建重组质粒,在对应的宿主菌中进行诱导表达,利用Ni2+亲和层析的方法分离带6个组氨酸标签的重组酶。将重组酶与不同的色氨酸衍生物在二甲基丙烯基二磷酸(dimethylallyl diphosphate,DMAPP)存在的体系中进行酶促反应,用HPLC技术检测产物的生成,结合NMR技术推测酶反应产物结构,并用Hanes-Woolf回归分析法测定其酶动力学参数Km和Kcat。 结果: 本实验成功克隆了黑曲霉的An13g01840基因,并且得到了具有生物学活性的融合蛋白,经过酶功能研究发现该重组蛋白具有异戊烯基转移酶活性,能接受侧链或者吲哚环稍有变化的一系列色氨酸衍生物作为酶促反应底物。对于22种色氨酸衍生物,在19种反应产物中检测到新化合物的生成,其中以L-色氨酸(L-Tryptophan,L-Trp)的转化率为最高。经NMR和HPLC分析证明,以L-Trp为底物的酶反应产物为7-二甲基丙烯基色氨酸(7-dimethylallyltryptophan,7-DMAT)。经过酶动力学测定得到下列数据:对于底物DMAPP,Km值为0.085 mM,Kcat值为0.097 s-1;对于底物L-Trp, Km值为1.487 mM,Kcat值为0.131 s-1。 结论: 首次克隆并表达了黑曲霉中的异戊烯基转移酶基因,其重组酶能接受色氨酸及其衍生物作为酶促反应底物,催化吲哚环C-7位的异戊稀基化反应,但其天然底物为何尚不能确定。
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盐酸苯环壬酯(phencynonatehydrochloride,PC,8021)是军事医学科学院毒物药物研究所研制开发的Ⅰ类抗胆碱能新药。经过多年的基础与临床试验证明,PC具有较好的抗晕动病和美尼尔
桃花蛊 中了桃花蛊的风景 是在多年前,旅途中遇见的 春雨过后,扁舟发芽 驿站灯火里,醉了酒 那片原野,那道山梁 还有天边,那条不安分的河 小狐狸,理一理云鬓的温柔 终于松开前世的手 不羁的灵魂,为什么不肯在此停留故 人 江湖之大,众鸟高飞 或没入青山,或没入芦苇 烟雨之间,长者一袭白袍 站立船头,抱拳施礼 朗朗笑声,高过浪涛 阳光探出云端 从上游到下游,走了几千年
我们是建筑工人 我们是来自大山里的建筑者 操着南腔北调,头顶高粱红穗花 塔吊伸出长长的手臂 我们既然有能力轻轻提起,就有能力 坦然放下,青砖铺平坎坷 黄土掩埋了矫情 我们把汗水渗入泥土 纤绳勒进臂膀 我们是生石灰,在深山里摸爬滚打了好多年 只要给足适量的水,就爆发强大的力 我们是钢筋混凝土,扛起一座座脊梁 我们是锯子,破坏成就着完美 我们是瓦刀,是抹子 填充世界的空虚
梅 园 梅会开花 满园的梅花不愿凋零的梅花 一朵比一朵更贪婪 早春那么美 丰沛的雨水还在远方等待修饰 我却开始沉下心来 试图去破译一朵花的咒语 去解开一朵花被毁之前的表情 却忽略了温暖的问候 像极了暧昧之情 抱着萌萌的初春大肆扩充面积 刺激着摘花的人 默默摘下最后一段迷途的夜色 梅花从眼前开到天涯 从元代开到现当代 都未曾断了赴约的念想 百首吟咏和赞美的梅花诗篇
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冬至日记 清晨梦醒。细雨绵绵,有祝福声声 此起彼伏,从此岸到彼岸 晌午时分。雨过天晴,去林间漫步 飞鸟追逐白云,斜阳渐成落日 暮色苍茫。寒潮四起,听灯下风语 白昼好短,留长夜给浪漫?图宾根 五月的图宾根 荷尔德林的故乡吟 是一个起点,也是一个终点 从这出发,走向黑格尔的历史: 历史是一堆灰烬,但 灰烬深处有余温 也是在这,张枣最终丢失了 留在镜中的凄美回响: 只要想起
蛋糕店门前的小菊花 一家蛋糕店门前,站着两排 小菊花。是“六一”儿童节后 幼儿园淘汰下来的。蛋糕店老板 把她们聚集在一起 小菊花们来自乡下的田畦。她们盼望 这个节日很久了。统一着装 ——尽管都是黑色的,破了边 塑料裙子,但站姿整齐,笑容纯净 自然。她们的表演很短,只需要 在固定的地点站一站。在孩子们放假前 在幼儿园园长祝辞之后,就被弃了 而现在,她们再次热闹起来,学着城里
收音机 小时候,我有强烈的冲动 拆开它,看看有多少人关在里面 没想到里面全是电子元件 串联成迷宫,干电池腐烂流脓 喇叭上的磁石,吸附着大量铁屑 肯定经历了一场场交锋 究竟谁对谁错? 三十多年过去了,我忽然明白 收音机,这一命名,暗藏天意 它们真的把声音都收走了 像一个个骨灰盒,静静地停放在灵堂上 收走了一位位老人,带走了很多秘密 任凭子孙后代哭泣,扼腕痛惜 也不开口说一