生物酶采油解堵技术是近年来发展起来的具有较好油田开发效果和提高采收率的一项新技术。生物酶解堵剂主要成分为蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶以及生物表面活性剂等,广泛应用于原油开采中,在增产增注、堵水控水、防砂、调剖等诸多方面取得了可观效果。其中,蛋白酶在生物酶采油解堵过程中起着一定的作用。为了最终研制出新型生物酶解堵剂,本论文做了如下研究工作,并得出结论:1.从大庆原油样品中初步分离筛选到5株产蛋白酶菌株,然后进行复筛培养,筛选出一株蛋白酶高产菌株S-H-5。通过形态学观察、生长特征观察和16SrDNA序列分析,对此菌株进行了菌种鉴定,鉴定结果表明,菌株S-H-5为铜绿假单胞菌。2.采用单因素试验和正交试验方法,对菌株的培养基及培养条件进行了优化研究。优化后,最适培养基为:可溶性淀粉15g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏20g/L,NaCl1.5g/L,CaCl20.02g/L,Na2HPO40.2g/L,NaH2PO40.1g/L。最佳培养条件为:初始 pH6.5,接种量5%(v/v),温度31℃,摇床转速160r/min,培养时间为72h。此时,菌株的蛋白酶酶活达628.03U/mL,较复筛菌株的蛋白酶酶活提高了 26.12倍。3.在最佳培养基及培养条件下,绘制菌株的生长曲线及产蛋白酶历程曲线。进一步对菌株S-H-5的发酵液进行离心、饱和硫酸铵沉淀、透析、浓缩和Sephadex-100凝胶层析分离纯化步骤。分离纯化的效果为:纯化倍数3.68,回收率30.08%。经SDS-PAGE电泳测定,此蛋白酶的分子量约为35.5kDa。4.复配实验:将得到的蛋白酶与纤维素酶、木聚糖酶及发酵离心上清液等进行复配,作为新型生物酶解堵剂。然后通过摇瓶培养、洗油实验等室内模拟试验,观察及测试新型生物酶解堵剂作用效果。此新型生物酶解堵剂能够对原油起到一定的降解、降粘作用,能够降低表面张力,洗油效果明显,具有很好的应用潜力,拥有一定的研究价值。