养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞存活率和P53基因表达的影响

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Mos_Lei
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目的:寻找养阴润目丸对干眼兔泪腺细胞生长的作用机制及在以P53为核心的信号传导通路中作用途径。方法:1.选用体重为1.5±2.0kg的健康普通新西兰兔15只,参照《常用实验动物与人体表面积比值表》计算出大鼠每日用药剂量,随机分组后分别予以蒸馏水、养阴润目丸、杞菊地黄丸灌胃,每日2次给药,连续灌胃7天,采血前禁食12h,予20%乌拉坦1.5g/ml麻醉后腹主动脉取血,高速离心后制备含药血清。2.实验兔麻醉后取双侧泪腺组织,采用胰酶消化法分离出泪腺上皮细胞,建立体外培养系统并用免疫组化法进行鉴定,用倒置显微镜观察泪腺上皮细胞生长状况。3.在常规培养液中加入TNF-α(2.5ng/ml)构建炎症微环境,制备稳定的兔干眼细胞模型。4.将第二代泪腺上皮细胞荧光素染色后,在荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,Real-time PCR法检测细胞中P53基因的表达。结果:与炎性因子干预A组相比,养阴润目丸组细胞形态较规则,坏死细胞减少,养阴润目丸能有效促进泪腺上皮细胞生长,抑制P53基因的表达。结论:养阴润目丸能改善兔干眼细胞模型泪腺的形态结构,可促进泪腺细胞分化、调节其生长,能够下调P53基因的表达。提示养阴润目丸治疗干眼的作用机制可能为抑制炎性因子TNF-α或减少P53基因的表达,从实验层面证实养阴润目丸治疗干眼的有效性。
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