论文部分内容阅读
近年来,许多肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)配体和受体超家族新成员被发现,其中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)及其受体( tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptors,TRAILR)更引人关注。TRAIL是1995和1996年分别由Wiley和Pitti等分离并鉴定。由于TRAIL具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,使其在肿瘤治疗中的研究成为热点。人类TRAIL基因定位于第3号染色体3q26区,编码281个氨基酸,相对分子质量为32.5kDa,属于Ⅱ型跨膜蛋白。TRAIL广泛表达于正常人的各种组织中。其胞外区形成同源三聚体结构,作用于相应受体发挥作用。现已发现的TRAIL受体有5种:DR4(death receptor-4)、DR5(death receptor-5)、DcR1(decoy receptor-1)、DcR2(decoy receptor-2)、OPG(osteoprotegerin),除OPG外其余受体都属于TNF受体超家族,属I型跨膜糖蛋白。DR4和DR5有高度的同源性(同源性为58%),均由胞外区、跨膜区和胞内区的死亡结构域(death domain,DD)组成,其胞外区与TRAIL结合。DcR1和DcR2与DR4和DR 5的胞外区相似,有高度同源的富含半胱氨酸的重复序列,能够与TRAIL结合。但胞内区差别很大,DcR1缺少跨膜区和胞内区,只能通过糖磷脂肌醇连接到细胞膜上。DcR2胞内区只有部分的DD,不能介导细胞凋亡。重组可溶型TRAIL在人类许多癌细胞系中均引起凋亡,包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌等常见的恶性肿瘤。此外,把重组可溶型TRAIL注入到已移植人结肠癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤及恶性胶质瘤的裸鼠体内,能产生显著的无全身毒性反应的抗肿瘤活性。既往研究发现多种肿瘤组织中有TRAIL及其受体mRNA的表达。但mRNA水平的表达不一定能够完全反映蛋白水平的表达。因为免疫组织化学技术在研究细胞蛋白水平表达方面更有优势,所以本实验通过免疫组织化学方法对221例10种常见肿瘤以及直肠癌旁组织37例,直肠癌切缘10例组织中TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1和DcR2的蛋白水平表达进行了研究,并探讨它们在这些肿瘤中的分布与其相应来源胚层的关系。本研究结果表明:TRAIL在正常直肠粘膜组织、癌旁组织及直肠癌组织中的表达呈递减趋势,提示TRAIL在直肠癌的发生过程中的含量减少;受体类型的表达也存在差异,DR在正常直肠粘膜组织、癌旁组织及直肠癌组织中的表达呈递增趋势,其中DR4阳性率为51.35%,DR5阳性率为67.57%,DR5的表达强于DR4(P<0.05);DcR在低分化直肠癌组织的表达高于高分化直肠癌组织中的表达。本研究还发现在鼻咽癌、喉癌、乳腺癌、前列腺癌、肾透明细胞癌、肝癌、胃癌、结肠癌、直肠癌和甲状腺乳头状癌中均有TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1和DcR2蛋白的表达,中胚层来源的前列腺癌和肾透明细胞癌的表达相对较低。外胚层和内胚层来源的肿瘤其TRAIL及TRAILR表达水平无显著性差异(P>0.05);而外胚层来源的肿瘤其TRAIL及TRAILR表达水平明显高于中胚层来源的肿瘤(P<0.05);内胚层来源的肿瘤其TRAIL及TRAILR表达水平亦明显高于中胚层来源的肿瘤(P<0.05)。以上结果表明TRAIL及TRAILR的表达与组织来源也有很大的关系,这为TRAIL应用于临床治疗,根据肿瘤的来源情况选择性制定治疗方案提供了形态学理论依据。为了进一步证明细胞的凋亡情况,我们利用TUNEL法检测细胞凋亡。通过本实验再次证明在鼻咽癌、喉癌、乳腺癌、前列腺癌、肾透明细胞癌、肝癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、甲状腺乳头状癌中TRAIL与其受体结合可诱导细胞凋亡,且内胚层和外胚层来源的肿瘤细胞凋亡率高于中胚层来源的肿瘤细胞凋亡率(P<0.05)。TUNEL法检测显示凋亡的肿瘤细胞数低于免疫组织化学染色方法所示表达TRAIL的细胞数。提示TRAIL及其受体的分布与组织来源有关,诱导凋亡的可能是膜相关TRAIL。对于影响TRAIL诱导凋亡的分子机制还有待于进一步的研究。