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内分泌干扰效应被发现后即引起了科学界和公众的广泛关注。美国、日本、欧洲许多国家相继展开内分泌干扰物筛检和测试,建立了一系列筛检方法体系。但既往着重研究单一物质和严重污染水体污染物的内分泌干扰效应,极少研究水体中低水平污染物混合暴露可能产生的内分泌干扰效应。由于水体是众多污染物最终归宿之一,而且目前常规水处理难以完全去除水体中的污染物,人群通过饮用水混合暴露于污染物,且有可能在以往认为安全的剂量水平对人类和野生动物产生损害效应。因此,研究污染物混合暴露的效应更能反映污染物的综合效应。故本研究在水源污染特征调查分析的基础上,观察水体有机提取物的内分泌干扰效应。
第一部分水体水质与有机提取物致突变性检测
从新建水库(TP)和备用水源(QDH)获取水样,检测富营养化状态并以国家标准评估水体污染情况,通过AllleS试验检测低剂量有机物混合(共存)暴露时的致突变效应,以反映水质综合质量。水源富营养化调查数据显示,TP富营养化状态指数(TSI)小于50,属中度富营养化水体。CODMn介于1.3-3.0mg/L,除氮、磷、CODMn外,水源水质达到《地面水环境质量标准》I类水质,表明水体有机物污染水平较低。依据《生活饮用水水质卫生规范》(2001)检测的常规34项和非常规40项均符合标准限值。而备用水源(QDH)水体呈富营养化,CODM。达6.0~8.Smg/L,表明有机物污染严重。Anles试验结果显示,备用水源水1.0-2.0L、出厂水2.0L活化前后均可导致TA98菌株发生移码突变:表明水体中存在直接或间接致移码突变物。0.5-2.0L组活化前后均未引起TA1.00菌株发生碱基置换突变。不同批次丰水期、平水期和枯水期样品检测的结果重现性好。TP水库不同采样点2.0L水样也可检出直接和/或间接致移码突变性。枯水期出厂水2.0L可直接引起移码突变。
第二部分水体有机提取物雌激素效应检测
‘以大鼠子宫匀浆提供雌激素受体,进行氚标记雌二醇雌激素受体配体饱和结合及非标记同源配体竞争结合试验、水体有机提取物竞争结合试验。研究结果表明,E:的ICso--0.5064nM,水体有机提取物与体外雌激素受体具有结合能力,其ICso=0.0040L/孔;利用体外活化系统对有机提取物进行活化后,其ICso=0.5517L/孔。表明有机提取物经活化系统代谢后与雌激素受体的亲和力下降。
以E-SCREEN试验检测水体有机提取物的雌激素敏感细胞增殖活性,在低剂量(0.10L/孔)时具有促进MCF-7细胞增殖活性,0.20L/孔时有细胞毒性。利用体外代谢系统活化后未显示出细胞增殖活性,O.10L/孔时即显示出细胞毒性。结合雌激素受体配体结合试验结果,水体有机提取物能与雌激素受体结合,具有MCF-7细胞增殖活性,表明水体有机提取物可能有雌激素活性。以体外代谢系统孵化后水体有机提取物与雌激素受体亲和力下降、雌激素敏感细胞增殖活性减小,与雌激素类物质经肝代谢失活的现象吻合。
在体外试验的基础上,通过子宫增重实验从整体水平研究有机提取物的内分泌干扰效应。从正常人日饮水0.5~8.0L体积中提取的有机物直接染毒小鼠,3d皮下注射子宫增重试验0.5-8.0L/60kg未出现子宫重量变化,但QDH水样4.0L/60kg组的上皮细胞高度显著大于阴性对照组,提示QDH水样可能具有雌激素效应。为探讨提高子宫增重实验对低剂量有机提取物筛检灵敏性的方法,一次皮下注射雌二醇后子宫形态学指标中的宫腔上皮高度、子宫壁厚、宫腔横截面、子宫横截面的敏感性好于子宫重量变化。提示子宫形态学指标可作为雌激素效应筛检的终点。但一次皮下注射水体有机物未引起子宫形态学变化,表明水体有机提取物检测浓度未引起整体动物雌激素效应。
第三部分水体有机提取物雄激素效应检测
Hershberger试验常用来评价化学物的雄激素和抗雄激素效应,本研究以正常人日饮水0.5~8.0L/60kg提取的有机物直接染毒动物,经口7dHershberger试验未检出对雄性去势大鼠的副性腺(前列腺、精囊腺并凝固腺、尿道球腺),阴茎头、球海绵体肌和提肛肌显示出雄激素或抗雄激素效应。
水体中含有极低浓度的雌激素活性物质,水体有机提取物能与体外雌激素受体结合、·诱导雌激素敏感细胞增殖。在正常成人日饮水量(0.5-8.0L/60kg/d)的有机物暴露未引起整体动物子宫增重实验、雄激素和抗雄激素实验阳性。表明水体有机物具有体外雌激素活性,但整体动物代谢酶系可能会降解其雌激素效应,未检出阳性。