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本研究旨在通过临床试验和动物实验观察刺梨冻干粉改善免疫炎性指标延缓肾纤维化进展的有效性,内容包括以下两个部分: 第一部分 目的:本研究旨在通过临床试验探讨刺梨冻干粉改善患者免疫炎性指标的有效性,达到治疗肾纤维化目的,为临床治疗肾纤维化提供理论依据。本部分包括:(1)刺梨冻干粉对慢性肾脏病(Chronic kidney disease CKD)3期脾肾气虚、湿热型患者临床疗效评估;(2)对CKD3期患者肾功能、免疫炎性指标的影响。 方法:选取符合纳入标准的CKD3期脾肾气虚、湿热型患者60例,随机化分为对照组和治疗组各30例,并从健康体检中选取30例作为正常组[用于检测外周血清白介素-12(IL-12)及白介素-4(IL-4)];除正常组,其它两组均在基础治疗上,对照组加服氯沙坦钾(50mg/d),治疗组加服刺梨冻干粉(2g/d),总疗程为3个月。(1)观察各组患者治疗前后中医临床症状变化,并进行评估和分析。(2)观察各组患者治疗前后24小时尿蛋白定量(U-Pro/24h)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肾小球滤过率(GFR)的水平变化和分析。(3)比较治疗前各组患者与正常组外周血清IL-12及IL-4的值,并观察治疗前后治疗组、对照组血清IL-12及IL-4值的变化和分析。 结果:(1)刺梨冻干粉能有效改善CKD3期脾肾气虚、湿热型患者的中医症状,与氯沙坦钾比较,能明显改善患者倦怠乏力、气短懒言、恶心、呕吐、食少纳呆。 (2)CKD3期患者在基础治疗上加服用刺梨冻干粉,能降低BUN,平稳Scr、U-Pro/24h的水平,提示刺梨冻干粉能延缓肾功能进展。 (3) CKD3期患者在基础治疗上加服用刺梨冻干粉,能降低IL-4及升高IL-12的值,说明刺梨冻干粉可调节CKD患者的免疫炎性指标。 结论:刺梨冻干粉能有效改善CKD3期脾肾气虚、湿热型患者的临床症状;可延缓肾功能;能够调节免疫炎症指标的作用。 第二部分 目的:本研究旨在通过动物实验探讨刺梨冻干粉治疗肾纤维化模型大鼠的有效性,达到抗肾纤维化的目的,为临床治疗肾纤维化提供科学的实验依据。本部分包括:(1)刺梨冻干粉对UUO模型大鼠病理组织的影响;(2)刺梨冻干粉对UUO模型大鼠肾功能、肾纤维化指标、免疫炎性指标的作用。 方法:通过对SD大鼠建立UUO模型,术后第2天,将大鼠随机分为假手术组、模型组、刺梨冻干粉组、氯沙坦钾组;前2组给予生理盐水,后2组分别给予刺梨冻干粉(300mg/100g)、氯沙坦钾(1mg/100g),以上四组均以每天1ml/100g灌胃给药;首次给药14天后,留取24h尿量后取材。(1)通过HE、Masson染色观察各组大鼠肾组织病理变化;(2)通过全自动生化仪检测各组大鼠肾功能U-Pro/24h、BUN、Scr的值;(3)通过免疫组化观察各组大鼠纤维化指标α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和Western blot检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;(4)通过Western blot检测各组大鼠免疫炎性指标核转录因子-KB p65(NF-KBp65)、TOLL样受体2(TLR2)的变化。 结果:(1)大鼠UUO术后,假手术组HE染色肾组织中肾小球、毛细血管,肾小管,间质结构基本正常,无明显炎性细胞浸润;Masson染色肾组织间质无胶原纤维或少许胶原纤维改变;模型组HE染色可见肾小球、肾小管结构紊乱,肾小管内中有空泡,脱水样改变,出现细胞核浓缩、聚集,可见蛋白管型,肾间质大量炎性细胞浸润;Masson染色肾间质可见明显的胶原纤维,部分呈现条索状或片状;氯沙坦钾、刺梨冻干粉组病理改变较模型组明显减轻。 (2)假手术组U-Pro/24h、BUN、Scr无明显变化,模型组的上述指标明显升高;与模型组比较,刺梨冻干粉组、氯沙坦钾组U-Pro/24h、BUN、Scr的值明显降低(P<0.05);氯沙坦钾与刺梨冻干粉比较,无显著性差异(P>0.05)。 (3)假手术组大鼠肾组织中α-SMA、Col-Ⅲ蛋白及TGF-β1蛋白表达量少,模型组上述指标明显升高;与模型组比较,刺梨冻干粉组、氯沙坦钾组大鼠肾组织中α-SMA、Col-Ⅲ、TGF-β1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);氯沙坦钾与刺梨冻干粉比较,无显著性差异(P>0.05)。 (4)假手术组大鼠肾组织中少许NF-KBp65、TLR2蛋白的表达,模型组肾组织中上述蛋白表达明显升高,与模型组比较,刺梨冻干粉组、氯沙坦钾组大鼠肾组织中NF-KBp65、TLR2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);刺梨冻干粉在降低TLR2、NF-KBp65蛋白相对表达水平上优于氯沙坦钾,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:刺梨冻干粉可改善UUO模型大鼠病理组织;改善肾纤维化指标;调节免疫炎性指标;延缓肾功能的作用,与临床结果一致。