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目的与背景:糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy DR)是细胞代谢及胰岛素激素异常,引起眼部组织、神经及血管微循(micro)环改变,最终造成眼的营养和视功能的损坏。糖尿病患者血液成分的改变,而引起血管内皮细胞功能异常,使血-视网膜屏障受损,以出血斑点、硬性渗出以及黄斑水肿等为表现的毛细血管病变,广泛的缺血可能会引起视网膜或视盘的新生血管、视网膜前出血、玻璃体积血及牵拉性视网膜脱离等,是致盲的主要因素之一。Müller细胞是视网膜上最大的视网膜胶质细胞,对视神经细胞具有保护和支持作用。高糖状态对糖尿病性视网膜病变起到了及其重要的影响,也是糖尿病性视网膜病变中损伤、预后和转归的关键因素之一。二项酶诱导剂CPDT对视网膜细胞具有保护作用。Bcl-2家族蛋白抗凋亡的重要蛋白,其中,Bcl-2通过在线粒体膜外发挥抗凋亡作用来维持线粒体膜的稳定和完整性。本研究将探讨高糖环境下CPDT对大鼠müller细胞凋亡的影响以及该作用是否通过凋亡相关基因Bcl-2和Bax通路发挥的作用。初步探索CPDT在糖尿病性视网膜病变防治中的前景。方法:本实验采用取原代培养的SD大鼠müller细胞,通过细胞培养基中加入高糖在倒置相差显微镜下观察,建立SD大鼠müller细胞的高糖损伤模型。处理72h后,将其随机分为3组:正常糖浓度对照组、高糖组、CPDT干预组。采用FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期改变情况。采用Western blotting法检测大鼠müller细胞Bcl-2和Bax基因蛋白的表达。对于所得的数据进行统计学分析(配对t检验,单因素方差分析)。结果:FITC/PI双染法流式细胞仪检测结果显示:与正常糖浓度对照组相比,高糖组细胞凋亡率明显增加(P=0.04 P<0.05),主要表现在晚期凋亡;而采用CPDT干预组与高糖组相比,CPDT可明显降低müller细胞凋亡率(P=0.02 P<0.05),各组细胞周期未见明显改变。Western blotting免疫印迹检测与正常糖浓度对照组相比,高糖组Bcl-2蛋白表达量较对照组明显降低(P=0.04 P<0.05),Bax蛋白升高(P=0.01 P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低;与高糖组相比,CPDT干预组较高糖组Bcl-2蛋白表达量提高(P=0.02 P<0.05)、Bax蛋白表达量降低(P=0.02 P<0.05),Bcl-2/Bax比值升高。结论:高糖可以抑制大鼠müller细胞活性,促进细胞凋亡;Bcl-2在高糖下表现出对细胞的保护作用。CPDT可提高高糖影响下的大鼠müller细胞活性、Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比值,抑制Bax表达,从而抑制高糖引起的大鼠müller细胞凋亡。CPDT对高糖环境中的müller细胞具有保护作用。CPDT通过对Bcl-2这一关键蛋白保护,阻止后续如细胞色素C与casepase9结合成凋亡复合体等形式,推测CPDT可能对糖尿病性视网膜病变有一定作用。