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烟曲霉(Aspergillus fumigatus)是一种腐生真菌,在自然界分布广泛。近年来,由烟曲霉感染的疾病呈上升趋势,引起了人们越来越多的关注。烟曲霉的细胞壁是其生长和致病性所必需的,其细胞壁的合成与组织涉及多种糖蛋白和多糖,因此,蛋白质糖基化修饰与烟曲霉的细胞壁合成密切相关。
α-甘露糖苷酶(α-mannosidase)是一种在N-糖链加工过程中起重要作用的酶,通过水解糖蛋白糖链上的甘露糖,并在其他酶的协同参与下对糖链进行修饰加工,从而保证了糖蛋白在细胞内的正确转运并发挥功能。
为研究烟曲霉中α-甘露糖苷酶及其所参与的N-糖基化加工过程的生物学功能,作者利用生物信息学方法在烟曲霉基因组中注释并克隆得到3个可能的α-甘露糖苷酶基因,分别是:属于I类α-甘露糖苷酶的msdS(AY573554)和Afmnsl(AY852253);属于II类α-甘露糖苷酶的Afmanl(AY852252)。本论文中作者研究了msdS和Afmanl的功能。
作者从烟曲霉YJ-407中克隆和表达了msdS基因,并进行了酶学性质的研究,证明msdS基因编码高尔基体α-甘露糖苷酶I。通过同源重组的方法获得基因敲除突变株△msdS。msdS基因敲除后,并不影响突变株糖蛋白的外泌,但外泌糖蛋白的N-糖链加工受到影响;△msdS突变株的生长和致病性也没有发生显著变化。对突变株的表型分析发现细胞壁组分发生改变、孢子形成受到影响,这些现象在高温培养条件下尤为明显。突变株在孢子萌发、菌丝生长和孢子形成过程中极性生长发生异常,出现随机出芽和分隔。作者的研究结果表明msdS基因的缺失可导致烟曲霉细胞极性生长异常。
同时作者还构建了Afmanl基因缺失突变株和msdS/Afmanl双基因缺失突变株,发现△Afmanl突变株与△Afmanl/msdS突变株也在孢子萌发过程中出现不同程度的极性生长异常,但突变株的生长未受影响。
作者的研究结果表明,α-甘露糖苷酶参与的N-糖基化过程虽然不是烟曲霉生长所必需的,但却与极性生长和菌丝分隔相关。这是第一次发现N-糖基化加工对细胞极性生长的影响。