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DNA疫苗是最近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,具有预防和治疗疾病的作用。流感病毒的核蛋白(nucleoprotein,NP)和基质蛋白(matrix proteinM)具有型特异性,根据NP和M的不同,可以将流感病毒分为A、B、C三型,且它们的核苷酸序列非常保守。本实验将A型流感病毒A/PR/8/34(PR8)(H1N1)的流感病毒核蛋白基因(NP)和基质蛋白基因(M)克隆入真核表达载体中,构建的DNA疫苗用小鼠模型来评估NP和M DNA疫苗的免疫保护作用,期望能在预防流感上取得一些成果。实验中共构建了NP基因(长1497 bp,表达498个氨基酸的蛋白质)、M1基因(长759 bp,表达252个氨基酸的蛋白质)和M2基因(长322 bp,表达97个氨基酸的蛋白质)三个基因的核酸疫苗,疫苗构建鉴定正确后,通过大量提取质粒制备核酸疫苗。并将实验按下述组别进行免疫:1)用NP核酸疫苗对小鼠进行二次、三次、四次、五次、六次免疫;2)用M1、M2核酸疫苗对小鼠分别进行二次、三次、四次、五次、六次免疫(M2只进行了四次、五次和六次免疫);3)用NP+M1(NP和M1 DNA疫苗混合)核酸疫苗对小鼠分别进行二次、三次、四次、五次、六次免疫。采集每次免疫后小鼠的血清,并在免疫完后一周进行致死量同型流感病毒感染实验,病毒感染后观察小鼠的体重丢失率和存活率,通过小鼠体内抗体滴度,存活率和体重丢失率三个指标来评价疫苗的免疫保护效果。实验结果表明,血清中抗M1 IgG抗体含量随着免疫次数的增加而增高,免疫六次时抗体含量最高,其它免疫组情况也大致相同,随着免疫次数的增长抗体呈上升趋势;在攻毒后的观察期中,体重丢失率M2＞M1＞NP＞(NP+M1);NP DNA疫苗在六次免疫后能提供50%以上的保护;M1 DNA疫苗在六次免疫后能对小鼠提供约40%保护;M2 DNA疫苗不能为小鼠提供保护;(NP+M1)DNA疫苗免疫的小鼠保护效果最好,只三次免疫就能提供80%以上的保护,它的保护效果要比单独免疫NP和M1好。