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目的:本研究通过体外实验对肿节风中新分离得到的单体迷迭香酸苷抗流感病毒效果进行评价。方法:1.CCK8法检测迷迭香酸苷对MDCK(狗肾细胞)和A549(人肺癌细胞)细胞的毒性。2.以磷酸奥司他韦为阳性对照,采用酶活实验(病毒表面神经氨酸酶活性)检测迷迭香酸苷在预防给药、预混给药、同时给药、治疗给药4种给药模式下对H1N1流感病毒感染A549细胞病毒抑制作用。3.以磷酸奥司他韦为阳性对照,在治疗给药模式下,用ELISA检测试剂盒检测迷迭香酸苷对H1N1流感病毒感染后A549细胞分泌炎症因子抑制作用。4.以磷酸奥司他韦为阳性对照,利用CCK8及酶活实验检测迷迭香酸苷对不同亚型流感病毒抑制作用。5.以磷酸奥司他韦为阳性对照,利用CCK8及酶活实验检测迷迭香酸苷对病毒不同细胞中流感病毒增殖的抑制作用。6.建立鸡胚模型,利巴韦林作为阳性药,通过观察鸡胚存活情况并进行血凝效价测定,评价迷迭香酸苷鸡胚内抑制H1N1流感病毒效果。7.建立细胞模型,利用酶活实验,考察H1N1流感病毒感染A549后,不同时间段(-2h～-1h,-1h～Oh,Oh～2h,2h～4h,4h～6h)加入迷迭香酸苷后流感病毒增殖情况,判断肿节风化合物抑制流感病毒增殖的时间阶段,考察迷迭香酸苷对流感病毒复制周期的影响。结果:1.迷迭香酸苷对MDCK细胞和A549细胞未表现出明显毒性,其半数毒性浓度TC50>250μM。2.迷迭香酸苷在治疗给药模式下对A549细胞具有较好抗H1N1流感病毒作用,半数有效浓度IC50为102.2μM,治疗指数SI>2.44;预混给药和同时给药具有一定的抑制病毒效果,预防给药未体现出抗病毒作用。3.迷迭香酸苷可抑制H1N1流感病毒感染的A549细胞中炎症因子IL-6及IP-10的表达。4.迷迭香酸苷在A549细胞中对H1N1流感病毒具有有效抑制作用,能抑制H9N2病毒的增殖。5.迷迭香酸苷在A549细胞和MDCK细胞中均能有效抑制H1N1流感病毒,其半数有效浓度IC50分别为102.2μM,85.37μM,治疗指数SI分别大于2.44和2.92。6.迷迭香酸苷在鸡胚内可有效抑制H1N1流感病毒。7.不同时间加药实验结果显示,迷迭香酸苷抗病毒效果与其作用时间有关,病毒感染前加入迷迭香酸苷不能有效抑制病毒复制,在病毒感染后0h～2h加入能明显抑制病毒的增殖。结论:本研究通过不同给药模式迷迭香酸苷对流感病毒复制影响实验证明迷迭香酸苷在0.39μM～200μM浓度可以抑制流感病毒感染A549细胞内病毒的复制,且治疗给药模式下效果最优。在治疗给药模式下,迷迭香酸苷在A549细胞上对H9N2禽流感病毒具有抑制作用,且可抑制MDCK细胞上H1N1亚型流感病毒的复制。鸡胚实验证明,迷迭香酸苷亦可有效抑制H1N1亚型流感病毒在鸡胚内的增殖。不同时间加药实验结果提示迷迭香酸苷抗流感病毒作用机制可能与病毒复制早期进入细胞有关。其作用靶点有待进一步实验验证。