新疆阿魏菇多糖的分离纯化与结构的研究

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本文以新疆清河阿魏菇(pleurotus ferulae Lenzi)为主要原料,对阿魏菇多糖(PFLP)进行了较系统的研究,包括提取条件优化,分离纯化,纯度鉴定,分子量及单糖组成测定,一级结构初探等方面,主要研究结果如下:1. PFLP提取条件优化用传统热水提取法和超声波辅助提取法分别提取PFLP。以PFLP得率为指标,进行单因素实验及正交实验,比较两种提取方法,得到最优提取工艺。结果表明:传统热水浸提法最佳实验参数为料液比1︰30、浸提温度90℃、浸提时间3h,PFLP的得率为9.01%;超声波辅助法最佳实验参数为料液比1︰30、超声温度60℃、70min超声时间、超声功率160w,PFLP的得率为11.03%。对比可知:超声波辅助提取法为最佳提取工艺。2. PFLP的分离纯化与纯度鉴定醇沉所得PFLP,利用sevag法、sevag加木瓜蛋白酶法、三氯乙酸(TCA)法这三种方法去蛋白,以多糖损失率及蛋白质去除率为指标,比较去蛋白率。结果表明sevag加木瓜蛋白酶的方法是最好的,蛋白质去除效果很好的同时多糖的损失率较低,在理想范围内,多糖损失率为22.56%,蛋白质去除率为81.2%。运用DEAE-52纤维素离子交换柱和SephadexG-100葡聚糖凝胶柱对去蛋白后的PFLP溶液进行初步分离和进一步纯化,得到两个纯化的多糖组分,分别命名为PFLP1和PFLP2。利用聚丙烯凝胶电泳、紫外、冻融试验进一步鉴别其纯度。结果表明PFLP1和PFLP2均为单一组分。3.PFLP一级结构初探采用SephadexG-100葡聚糖凝胶过滤法测定分子量,结果表明PFLP1的分子量范围为5500~6000Da,PFLP2的分子量为7900~8400Da。利用气相色谱法(GC)测定单糖组成,结果表明: PFLP1由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1︰1.66︰19.6︰3.98;PFLP2由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,摩尔比为1︰0.40︰0.66︰6.76︰4.27。采用高碘酸氧化、Smith降解对PFLP1和PFLP2的结构进行初探,结果表明: PFLP1和PFLP2中葡萄糖的连接方式均是以1→6糖苷键为主,同时存在1→2、1→2,6分支以及一些末端糖基1→;其它存在的单糖如PFLP1中的鼠李糖、甘露糖和半乳糖;PFLP2中的鼠李糖、木糖、甘露糖和半乳糖绝大部分均是以1→3糖苷键为主,在葡萄糖主链、支链中穿插。红外光谱分析和原子力显微镜(AFM)分析PFLP1结构,表明其糖环形式为吡喃糖环,多糖分子具有高度分支结构。
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