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目的:近年来,研究发现牙周可疑致病菌感染与许多重要肿瘤相关。具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum）作为重要牙周病致病菌广泛存在于口腔中,属橙色复合体,梭杆菌属,兼性厌氧菌,研究显示F.nucleatum比口腔其他细菌更广泛存在于身体其他器官,与呼吸系统疾病,肝脓肿,早产等疾病密切相关。细胞DNA损伤是细菌破坏基因组稳定性和完整性,从而影响肿瘤细胞的遗传改变的重要机制,其中真核细胞内最常见的损伤为DNA双链断裂（DNA double-strand break,DSB）,人类和高等真核生物中最常见的DSB的主要修复途径是非同源重组修复（Non-homologous end joining,NHEJ）,因此本文探讨F.nucleatum感染口腔鳞癌细胞发生DNA双链断裂损伤后影响基因组的稳定性和完整性,并对细胞增殖能力产生调控作用。通过检测DSB标志因子γH2AX表达构建F.nucleatum感染Tca8113舌鳞癌细胞DNA损伤模型,观察细胞增殖和细胞周期的变化,进一步检测NHEJ重要修复因子Ku70,抑癌因子wild p53,抑癌因子p27和促癌因子突变型p53的表达,探讨F.nucleatum对口腔肿瘤细胞周期、增殖能力和抑癌能力的影响以及可能的依赖途径,为进一步明确其损伤修复机制提供理论依据。方法:第一部分,选择F.nucleatum ATCC 25586感染复数（MOI）500:1感染Tca8113舌鳞癌细胞构建DNA损伤模型,分别在0h,4h,12h,24h,36h,应用Western blot法检测损伤因子γH2AX蛋白表达,免疫荧光检测DNA双链断裂损伤因子γH2AX进一步验证损伤模型,CCK-8法检测细胞增殖,确定细胞周期变化。第二部分,Real-time PCR和Western blot检测修复因子Ku70 mRNA和蛋白表达,同时检测通路下游因子抑癌因子wild p53 mRNA表达,检测抑癌因子p27和促癌因子mutant p53表达变化。利用质粒转染过表达修复因子Ku70,再次检测转染后Tca8113细胞在F.nucleatum感染24h后细胞增殖能力,及转染细胞内下游因子wild p53 mRNA表达。结果:第一部分,成功构建F.nucleatum感染Tca8113舌鳞癌细胞DNA损伤模型,随着时间延长,损伤因子γH2AX蛋白表达增强并呈现时间依赖性,24h变化最为显著（P<0.05）。免疫荧光结果进一步表明感染24h时,DNA损伤因子γH2AX荧光强度和数量相比于对照组显著增强,证实模型构建成功。F.nucleatum感染36h内,感染组细胞增殖能力与对照组相比显著增强,呈现时间依赖性（P<0.05）,说明在构建损伤模型内,F.nucleatum感染促进细胞增殖。细胞周期检测发现G1期细胞减少,S期细胞增多,说明F.nucleatum感染调控细胞周期阻滞于S期（P<0.05）。第二部分,F.nucleatum感染36h,DNA修复因子Ku70 mRNA和蛋白均表达下降（P<0.05）,损伤因子持续上调,提示F.nucleatum感染Tca8113细胞DNA损伤可能激活非同源重组修复途径,且细胞损伤超出细胞修复能力。感染36h,通路下游抑癌因子wild p53 m RNA表达水平呈持续下降趋势（P<0.05）,进一步发现抑癌因子p27 m RNA在36h内呈下降趋势（P<0.05）,而促癌因子mutant p53蛋白表达则呈上升趋势（P<0.05）,提示细胞抑癌能力可能发生下降。通过转染过表达DNA修复因子Ku70至对照组5倍（P<0.05）,转染组细胞增殖能力无明显增强（P>0.05）,而通路下游抑癌因子wild p53 mRNA表达增高（P<0.05）,说明F.nucleatum感染Tca8113舌鳞癌细胞发生DNA损伤后依赖Ku70/p53通路促进细胞增殖。结论:具核梭杆菌在感染复数500感染Tca8113舌鳞癌细胞,发生DNA双链断裂损伤,并提示可能启动非同源重组修复途径。但当细胞修复能力不足时,具核梭杆菌调控Tca8113舌鳞癌细胞阻滞于S期,通过Ku70/p53途径促进Tca8113舌鳞癌细胞增殖能力,同时细胞抑癌基因表达下降。