论文部分内容阅读
近年来,兽药的安全使用越来越受到人们的重视,动物性食品中的兽药残留,已经引起了社会的普遍关注。酮洛芬具有消炎作用强、疗效高、毒副作用小、使用方便等诸多优点。为了制定酮洛芬在牛奶中的弃奶期,确保动物性食品质量安全,本文建立了酮洛芬在牛奶中残留的液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）,开展了酮洛芬注射液在健康荷斯坦奶牛乳中的残留消除规律研究,为科学合理用药提供依据。建立酮洛芬在牛奶中残留的LC-MS/MS测定方法。牛奶样品采用甲醇提取,浓缩后用0.1%甲酸水-乙腈溶液（90/10,v/v）溶解,高速离心后过滤膜,LC-MS/MS测定,内标法定量。色谱柱为Agilent EcliPse XDB-C18（5μm,4.6×150 mm）不锈钢色谱柱,流动相为0.1%甲酸水溶液（A）和色谱纯乙腈（B）,梯度洗脱;流速为0.25 mL/min;洗脱程序流动相A的比例变化:01.0分钟为90%,1.01.5分钟为9010%,1.57.5分钟为10%,7.58.0分钟为1090%,8.013.0分钟为90%;进样量为5μL。质谱仪为Agilent 6410B型电喷雾—串联四级杆质谱仪,采用多反应监测（multiple-reaction monitoring,MRM）正离子模式对酮洛芬进行定性与定量分析,酮洛芬的定量离子对为255.1>209.2,酮洛芬-D3的定量离子对为258.1>212.1。在5μg/kg200μg/kg浓度范围内,酮洛芬和酮洛芬-D3的比值与浓度呈现良好的线性关系,相关系数大于0.99。在5μg/kg、25μg/kg、50μg/kg和100μg/kg四个添加水平下,平均回收率为100.53%103.05%,批内变异系数（coefficient of variation,C.V.）为1.72%7.82%,批间变异系数为1.13%10.84%,酮洛芬在牛奶中的检测限（Limit of detection,LOD）为1μg/kg,定量限为（limit of quantification,LOQ）5μg/kg。20头健康荷斯坦奶牛,高产、低产各10头,颈部肌内注射酮洛芬注射液,剂量为3 mg/kg.b.w.,一天一次,连用三天。分别于首次给药后2、15、26、39、50、64、74、87、98 h采集奶样,进行残留消除规律研究。结果表明,酮洛芬在机体内消除快,首次给药后2 h,奶样中酮洛芬的最高浓度为（38.43±3.90）μg/kg,低于最高残留限量（maximum residue limit,MRL）50μg/kg,停药后15 h,奶样中均检测不到酮洛芬。本研究建立了酮洛芬在牛奶中残留的LC-MS/MS测定方法,该方法重现性好、灵敏度高、特异性强、前处理方法简单易行,符合兽药残留分析的要求。开展了酮洛芬注射液在健康荷斯坦奶牛乳中的残留消除规律研究,弃奶期为0 d。