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目的:1.探索、讨论氢气促进肺腺癌A549细胞凋亡、抑制其增殖的作用及其机制。2.结合转录组测序结果,采用western blot实验验证P21、CDK4、caspase-7、caspase-9在20%、40%、60%浓度氢气作用的肺癌A549细胞株以及对照组中的表达是否存在差异。3.免疫组化实验验证肺癌A549细胞转移瘤的瘤体组织中的P21、CDK4、caspase-7、caspase-9的表达在的在对照组、氢气组、顺铂组中表达是否存在差异。方法:1.培养肺腺癌A549细胞至对数生长期,然后应分别用20%浓度、40%浓度、60%浓度的氢气进行干预,每次干预2小时,连续干预3天,每天干预前在显微镜下观察细胞生长情况,并进行图像采集,干预结束后收集细胞,然后使用流式细胞仪来检测细胞凋亡情况及细胞周期。2.把常规培养的腺癌A549细胞作为对照组,将按照第一步处理的腺癌A549细胞作为实验组,处理结束后进行收集,并提取蛋白,采用western blot技术检测细胞中P21、CDK4、caspase-7、caspase-9的表达情况。3.采用免疫组织化学方法检测肺癌A549细胞转移瘤的瘤体组织中的P21、CDK4、caspase-7和caspase-9的表达情况。结果:1.20%浓度、40%浓度、60%浓度氢气均可以促进肺癌A549细胞的凋亡、抑制其增殖。2.P21在40%浓度氢气和60%浓度氢气处理的腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为升高趋势,CDK4在60%浓度氢气处理的肺腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为下降趋势,caspase7在20%浓度氢气、40%浓度氢气和60%浓度氢气处理的腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为升高趋势,caspase 9在40%浓度氢气和60%浓度氢气处理的腺癌A549细胞中的表达与对照组相比,表现为升高趋势,在统计学数据显示差异拥有统计学意义(P<0.05),P21在对照组及20%浓度氢气组两组间的表达统计学显示不具有统计学意义(P>0.05);CDK4在对照组及20%浓度氢气组、40%浓度氢气组的表达无统计学差异(P>0.05);caspase 9在对照组及20%浓度氢气组两组间的表达统计学显示不具有统计学意义(P>0.05)。3.采用免疫组织化学方法检测肺癌A549细胞转移瘤的瘤体组织中P21、CDK4、caspase-7以及caspase-9表达,P21、caspase7、caspase9在氢气组及顺铂组的表达与对照组相比,表现为升高趋势,CDK4在氢气组及顺铂组表达,与对照组相比,表现为下降趋势,统计学数据显示差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.高浓度的氢气具有促进肺癌A549细胞凋亡、抑制其增殖的能力。2.高浓度的氢气可造成P21、caspase7、caspase9蛋白在肺癌A549细胞转移瘤组织及肺癌A549细胞株中表达的上升,CDK4蛋白表达的下降。提示氢气有可能通过升高P21、caspase7、caspase9蛋白表达量、降低CDK4蛋白表达量,从而发挥其促进肺癌A549细胞凋亡,抑制其增殖的作用。