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背景及目的脓毒症是多因素共同作用导致的获得性疾病，可由先天应激，细胞损伤以及器官功能障碍等因素引起,系感染、烧伤、严重创伤、外科大手术、病理产科、中毒及心肺复苏术后常见的并发症，是ICU的首要致死原因，其病死率仍高达30%-70%，其发生率仍以每年1.5%-8%的速度上升。脓毒症时最常累及肠道，当肠道损伤时，其通透性增加、肠屏障功能受损，肠道细菌及其毒素得以吸收进入循环系统而发生细菌移位，使全身炎症反应综合症(SIRS)加剧、失控，严重时诱发多器官功能障碍综合征(MODS)，甚至危及患者生命。已经有众多研究表明肠道功能降低与肠道屏障关系密切。肠道屏障由机械屏障、化学屏障、免疫屏障与生物屏障共同构成，其中机械屏障和免疫屏障的功能是判断肠道屏障功能的常见指标，机械屏障是指完整的彼此紧密连接的肠粘膜上皮结构。肠粘膜防御素-5(RD-5)和肠三叶因子家族-3(TFF-3)蛋白是常用的判断肠免疫屏障功能的指标蛋白。而众所周知，TNF-α、IL-6和HMGB1是脓毒症发生、发展中最重要的促炎因子，严重影响脓毒症中肠道功能的恢复，甚至造成全身多器官的损害。以上活性因子可以促进炎症反应，改变血管紧张度以及通过特定G蛋白受体增加血管通透性。另外这些细胞因子间形成了联系紧密的互动关系，可以形成“炎症瀑布效应”。近期有多项研究表明TNF-α、IL-6、HMGB1与脓毒症的严重程度及预后关系密切。因此观察TNF-α、IL-6、HMGB1等指标对于脓毒症的预防和治疗具有重要意义。乌司他丁(Ulinastatin)系健康成年男性尿液中分离、纯化出来的一种糖蛋白，其可对多种蛋白水解酶的活性有抑制作用，是一种广谱的蛋白酶抑制剂(Ulinary trypsininhibitor,UTI)，另具有抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子产生、稳定溶酶体膜，清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用。Ghrelin是生长激素促分泌素受体(GSHR)的内源性配体，大部分Ghrelin由胃底部X/A样细胞分泌，另外一部分Ghrelin来源于小肠。它能够与体内的GHSR结合，剂量依赖性的促进生长激素释放，进而通过GH/IGF-1轴介导其生物活性。众多的研究表明，Ghrelin能够明显促进胃肠蠕动，加快胃肠排空。对于脓毒症引起的麻痹性肠梗阻， Ghrelin也有很好的疗效。同时，Ghrelin能够明显改善缺血再灌注大鼠胃肠道的溃疡形成、组织充血及毛细血管通透性改变，降低血TNF-α浓度。虽然已有研究表明UTI、GHL在脓毒症时对脏器功能障碍均有改善作用，但针对脓毒症肠功能障碍的特异相关性研究较少，且作用相应机制也不甚明了。鉴于脓毒症发生发展过程中肠道功能的重要作用，本实验拟以内毒素血症大鼠为脓毒症模型，观察了UTI、GHL对其小肠屏障功能、运动功能及全身和肠道局部炎症反应的影响，以期为脓毒症时肠功能障碍的治疗提供理论及实验依据。方法将所有大鼠采用随机数字法随机分为5组(n=12)，对照组(CON组)、内毒素组(LPS组)、乌司他丁组(UTI组)、Ghrelin组(GHL组，)、UTI+Ghrelin组(UTI+GHL组)。大鼠以3%的戊巴比妥钠(35mg/kg)腹腔麻醉。各实验组麻醉后，以内毒素(Lipopolysaccharide，LPS，15mg/kg)腹腔注射构建内毒素血症模型,CON组以等量生理盐水代替内毒素腹腔注射。在LPS注射后10min，UTI组以UTI15万U/kg腹腔注射，GHL组给予Ghrelin25μg/kg腹腔注射，UTI+GHL组给予UTI15万U/kg+Ghrelin25μg/kg腹腔注射，CON、LPS组给予同等剂量生理盐水。各组12h后再次给药。每个实验组于术后12h和24h分别处死6只大鼠，采用HE染色、RealTime-PCR、小肠葡聚糖蓝-2000(BD-2000)推进率和ELISA等方法观察各组大鼠小肠屏障功能、小肠运动功能以及炎症介质TNF-α、IL-6、HMGB1等变化。结果HE染色结果显示UTI+GHL组、UTI组与LPS相比能不同程度减轻回肠结构损伤，且UTI+GHL组更明显(P<0.05)。UTI组和UTI+GHL组在RD-5和TFF3mRNA表达水平方面较LPS组有显著提高(P<0.05)，且UTI+GHL组升高明显(P<0.05)。GHL组和UTI+GHL组较LPS组小肠运动功能均显著升高，且UTI+GHL组更为明显(P<0.05)。UTI+GHL组、UTI组、GHL组与LPS相比均能显著降低TNF-α、IL-6、HMGB1等炎症因子表达(P<0.05)，且在肠粘膜组织中发现了类似结果。结论本实验首先通过观察脓毒症时小肠粘膜微结构损伤程度以及RD-5和TFF3mRNA表达水平变化，证实UTI和Ghrelin联用能明显改善肠道内皮细胞免疫功能，保护肠黏膜屏障，有效缓解脓毒症症状，减缓脓毒症病情的发展。其次UTI联合Ghrelin能够有效降低脓毒症大鼠全身及肠粘膜炎性因子的过度激活与释放使得肠道功能得到改善。肠屏障结构和功能的损害，必然导致肠运动功能的减弱。因而，虽然本实验未观察到脓毒症时Ghrelin对肠粘膜有直接的保护作用，但却通过改善肠运动功能，增强了UTI对肠粘膜的保护效应。根据实验结果分析，内毒素血症时全身炎症反应及肠组织局部炎症反应可被UTI联合GHL明显抑制，达到改善肠道屏障及提高肠道运动功能。