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酒精性肝病（Alcoholic liver disease ALD）是全球慢性肝病的一种,它可能导致一系列的肝性疾病,并且对身体各部分脏器造成损耗。它的病发机理比较复杂,其病因与乙醇（ETOH）代谢引起的氧化-抗氧化的系统应激、谷胱甘肽的耗尽、蛋氨酸消耗代谢异常、营养缺乏和营养补充不足和内毒素引起细胞凋亡有关。而ALD常见的治疗方式是通过戒酒、营养补充剂和药物的摄入,达到恢复肝健康的目的。这几种治疗方法实施困难而且存在副作用。开发一种新型的食疗产品代替药物是个必行的趋势。生物活性肽是一种天然的食疗产品,其中包含多种功能多肽,抗氧化肽也是其中的一种。抗氧化肽有着清除自由基、抗氧化、抗菌和抑制脂质过氧化的作用。已经有研究表明酪蛋白来源的抗氧化肽,它们有着一定的抗氧化活性。为此,本课题选取酪蛋白为原材料,进行获取抗氧化肽,在验证其抗氧化性的基础上,进一步研究抗氧化肽对乙醇氧化损伤肝细胞（HHL-5）的保护作用,同时探讨在血液微环境中抗氧化肽和血液中的一些成分对乙醇氧化损伤肝细胞（HHL-5）的保护作用的影响。本课题采用酪蛋白水解获得酪蛋白水解物,并导入三种外源氨基酸（苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸）的plastein反应修饰物。评估四种产物对乙醇诱导氧化损伤的肝细胞HHL-5的细胞存活率、胞内内置物、胞内ROS含量、细胞凋亡和细胞循环周期的影响。CCK-8法结果分析表明,4种产物（CH、CH-tyr、CH-phe和CH-try）对乙醇氧化损伤的肝细胞有着明显的保护作用,细胞存活率分别由74.02%提高到95.57%、97.28%、90.22%和99.25%,随着时间增长和浓度增长,保护效果也明显增长。胞内ROS含量结果表明,在正常细胞内荧光强度为33.34,损伤后的肝细胞的荧光强度为76.42,4种产物（CH、CH-tyr、CH-phe和CH-try）保护组的荧光强度分别为52.34,50.52,50.27和48.48。流式细胞仪检测结果表明,凋亡预防试验组中,细胞凋亡的比例由24.0%降低到6.00%。凋亡救回试验组中,细胞凋亡的比例由24.0%降低到10.0%。4种产物对乙醇氧化损伤的肝细胞均表现出抗凋亡性,且预防效果好于救回效果。进而研究了在预防时期内,4种产物对细胞周期中S期有着不同程度的影响,且导入色氨酸的抗氧化肽对肝细胞S期的影响促进生长且为24.98%,这一结果表明,抗氧化肽对于肝细胞HHL-5的细胞周期改变,进而改变细胞的增殖效率,从而预防凋亡组保护效果强于救回凋亡组。总体来看,4种产物（CH、CH-tyr、CH-phe和CH-try）对乙醇氧化损伤的肝细胞HHL-5有着明显的保护作用。采用CCK-8法、培养基内LDH含量、胞内MAD和胞内ROS水平的测定,证明抗氧化肽（CH-try）分别与维生素类（维生素A、维生素C和维生素E）和离子类(K+、Zn2+、Mg2+和Ca2+)的共同作用于乙醇氧化损伤的肝细胞的影响。CCK-8法和培养基内LDH含量的检测结果表明:抗氧化肽（CH-try）与维生素类对乙醇损伤的肝细胞均表现出协同保护作用,随着时间的增长,协同作用增强,细胞存活率从66.35%提高到96.22%,作用效果明显;抗氧化肽（CH-try）与离子类对乙醇损伤的肝细胞的作用,表明CH-try和钾离子不存在协同或拮抗的作用,锌离子存在协同保护作用,镁离子和钙离子在抗氧化肽低浓度时表现存在协同作用且浓度0.05mg·m L-1协同作用强于1.00 mg·mL-1的协同作用效果。而高浓度时存在拮抗作用且浓度2.00 mg·mL-1拮抗作用强于1.50 mg·mL-1的拮抗作用效果。胞内MDA含量和胞内ROS含量的测定的结果表明,在2 mg·mL-1的抗氧化肽（CH-try）与维生素类对乙醇氧化损伤的HHL-5细胞均再次呈现出协同保护作用;在1 mg·mL-1的（CH-try）与离子类对乙醇损伤的肝细胞均再次表现出协同保护作用,随着时间的增长,协同作用增强。总而言之,酪蛋白本源的抗氧化肽,对乙醇诱导氧化损伤的肝细胞（HHL-5）有着明显的保护作用,且在人体生理范围血液内,部分血液成分促进了其对肝细胞（HHL-5）的保护作用。