【摘 要】
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目的:观察右美托咪定（DEX）对脓毒症大鼠肠上皮细胞的自噬影响。方法:1.实验对象与分组:选择40只SD雄性大鼠为研究对象,8～9周龄,体重230～270g。将其随机分为4组:假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、右美托咪定组（DEX组）、右美托咪定+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组（DEX+3-MA组）。2.大鼠脓毒症模型的制作与分组给药:除Sham组外,其他组参照文献以盲肠结扎
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目的:观察右美托咪定（DEX）对脓毒症大鼠肠上皮细胞的自噬影响。方法:1.实验对象与分组:选择40只SD雄性大鼠为研究对象,8～9周龄,体重230～270g。将其随机分为4组:假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、右美托咪定组（DEX组）、右美托咪定+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组（DEX+3-MA组）。2.大鼠脓毒症模型的制作与分组给药:除Sham组外,其他组参照文献以盲肠结扎穿孔法（CLP）建立大鼠脓毒症模型。Sham组仅开腹暴露盲肠,不结扎,不穿孔。模型制备后,DEX组腹腔给予注射40ug/kg DEX,DEX+3-MA组在DEX组基础上腹腔注射15mg/kg 3-MA。3.血清炎性因子水平测定:给药后24h采取尾静脉血样,参照ELISA试剂盒中的说明测定血清中TNF-α、IL-6水平。4.观察肠黏膜病理改变和进行Chiu氏病理评分:取血后处死大鼠取小肠组织,组织切片经HE染色后,用光学显微镜观察肠黏膜病理学改变,并进行Chiu氏病理评分。5.蛋白质印迹法检测自噬相关标志物:取血后处死大鼠取小肠组织,采用Western-blot分析肠黏膜上皮自噬相关标记物Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白相对量表达情况。结果:1.血清炎性因子浓度结果显示:Sham组血清TNF-α、IL-6浓度较低。与Sham组比较,Model组血清TNF-α、IL-6浓度显著升高（P＜0.01）;与Model组相比,DEX组与DEX+3-MA组血清TNF-α、IL-6浓度降低（P＜0.01）;与DEX组相比,DEX+3-MA组血清TNF-α、IL-6浓度升高（P＜0.01）。2.肠黏膜病理改变和Chiu氏病理评分结果显示:Sham组肠黏膜结构完整,排列整齐紧密,仅伴少量炎细胞浸润,Chiu氏病理评分较低;与Sham组相比,Model组肠黏膜的完整性遭到严重破坏,细胞坏死脱落,排列紊乱,炎症细胞浸润明显,Chiu氏病理评分明显增加（P＜0.01）;与Model组相比,DEX组和DEX+3MA组肠黏膜破坏程度减轻,炎细胞浸润减轻,Chiu氏病理评分降低（P＜0.01）;但与DEX组相比,DEX+3MA组的黏膜破坏程度和炎细胞浸润较重,Chiu病理评分评分也增加（P＜0.01）。3.蛋白质印迹法检测自噬相关标志物结果显示:Sham组肠黏膜上皮自噬相关标记物Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平较低。与Sham组比较,Model组肠黏膜上皮自噬相关标记物Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达上调（P＜0.01）;与Model组相比,DEX组肠黏膜上皮自噬相关标记物Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达上调（P＜0.01）,而DEX+3-MA组肠黏膜上皮自噬相关标记物Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达下调（P＜0.01）;与DEX组相比,DEX+3-MA组肠黏膜上皮自噬相关标记物Atg5、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达下调（P＜0.01）结论:右美托咪定可能通过上调自噬表达,抑制炎症水平,从而实现对脓毒症大鼠肠上皮的保护作用。
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