玉米籽粒产淀粉酶内生细菌的分离鉴定及其发酵条件与酶活力分析

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玉米是重要的饲料原料,为提高动物的饲料消化率,本试验对玉米籽粒内生细菌进行了分离鉴定。筛选出一株产淀粉酶的细菌,经显微镜镜检及分子生物学鉴定为Bacillusvelezensiis,对该菌产淀粉酶的发酵条件进行优化,并对该酶进行了酶活力分析。结果如下:(1)从玉米籽粒中分离筛选出一株产淀粉酶的细菌菌株D1,通过形态学观察与16S rDNA测序结果和系统进化树分析,发现该菌株与B.velezensis的16S rDNA序列同源性高达99.9%,因此鉴定该菌为B.velezensis,命名为B.velezensis D1。(2)为提高菌株产酶能力,先对发酵培养基的成分做了优化,最后培养基成分确定为在100 mL的培养基中加入玉米粉1.0 g,豆粕粉1.5 g,CaC12 0.04 g,KaHPO41.4 g。进一步对该菌株的产酶发酵温度、发酵时间、初始发酵pH、装液量、接种量、摇床转速和碳氮比进行单因素试验。试验发现影响该菌发酵条件的主要因素为:发酵时间、发酵温度、初始pH和装液量,对发酵的条件进行了 L9(34)正交试验优化。结果表明在44℃、60h、pH7.5、装液量为100 mL/250 mL是该菌的最优产酶发酵条件。其影响大小顺序为:发酵温度>装液量>发酵时间>pH。(3)通过对淀粉酶的酶活力研究表明,该酶的最适反应温度为60℃,最适pH为8.0。该酶在50℃条件下仍有较好的稳定性;在pH5.0~6.0之间该酶较稳定,这说明该酶具有较强的耐酸性。添加金属离子使底物溶液终浓度为1mmol/L时,Ca2+、Cu2+对酶活力有明显的促进作用,Mg2+、K+、Zn2+、A13+、Fe3+、Mn2+、Na+、Fe2+对酶活力都有不同程度的抑制作用,其中Fe2+对酶活力抑制作用最明显。该酶对谷物淀粉类具有广泛的分解能力。
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