糖复合物,是一类在自然界中十分普及的物质,同时它也是生物体不可或缺的一部分。其中糖蛋白参与着生物的众多生理病理过程,与人类疾病存在着密切关联。因此,为了一些疾病的检测、预防以及治疗,糖蛋白药物的开发得到重视,糖蛋白及糖肽的合成成为了科研的热点。本论文共分为四个章节。第一章节为绪论;第二章节为ApNGT参与生物活性糖肽的合成;第三章节为globotriose-DANYTK糖金纳米复合物的合成及其在检测志贺氏毒素方面的应用;第四章节为体内一锅法合成globotriose蛋白缀合物的初步探究。首先,本课题组进行了三组N-连接生物活性糖肽的合成。利用文献中报道的糖基转移酶ApNGT(来源于胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae)以及可用于糖链延伸的后续相关糖基转移酶LgtB、LgtC、PmST1 以及Pd2,6ST,体外进行了三种糖肽即globotriose-DANYTK、Neu5Acα2,31actose-DANYTK 以及 Neu5Acα2,61actose-DANYTK 的合成,反应的产物经过了 RT-HPLC、MS或神经氨酸酶作用体系的鉴定。此三种糖肽具有重要病理学过程和药物开发的价值,例如globotriose与人类肿瘤相关糖抗原和志贺氏毒素感染存在着紧密联系;唾液酸糖肽具有良好的抗细菌、抗病毒的作用,同时唾液酸作为肿瘤标记物在肿瘤的检测中应用重大。另外,体外酶法获得糖肽的成功也为体内合成糖蛋白复合物提供了理论的可能。其次,第三章我们将获得的globotriose-DANYTK进行了具体的应用。Globotriose与志贺氏毒素之间存在着特异性的结合,利用这种特异性我们借助新型仿生酶材料Au@FePor-TFPA-COP设计了一种操作便利且可肉眼识别的生物免疫传感器。Globotriose-DANYTK与材料结合形成的糖肽纳米复合物经过傅里叶红外光谱及扫描电镜等多种手段的表征后成功地对志贺氏毒素Stx1的检测建立了标准曲线,为快速检测毒素提供了另一种选择。本文的第四章对体内一锅法合成globotriose蛋白缀合物平台的建立进行了探究。本章中首先将载体蛋白基因MBP及相关的糖基转移酶基因、糖核苷酸合成酶基因进行克隆并将其构建于质粒载体上,希望通过体内共表达多个质粒获得蛋白缀合物。利用这个平台,我们摆脱了传统PglB产物位于周质空间的困扰,为蛋白缀合物的合成提出了新的思路,同时利用这个平台可以实现不同蛋白缀合物的合成,一步生产平台为蛋白的多糖结构修饰提供了更为便利的途径。