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该研究的目的是以TaqMan技术为基因建立荧光定量RT-PCR检测HER2/neu基因mRNA表达的方法,通过对不同病理类型原发性乳腺癌患者组织中HER2/neu基因mRNA的定量,初步了解HER2/neu基因mRNA在整个乳腺癌患者中的表达率,分析HER2/neu基因和乳腺癌患者预后的相关性,为该技术应用于临床奠定基础.材料和方法:1.研究对象:该实验自2002年1月-2002年12月共收集了3例肿瘤组织毗邻的正常健康乳腺标本,17例乳腺增生患者的标本和83例在病理学上确诊为原发性乳腺癌的初治患者癌组织标本.符合该次研究的乳腺癌标本其肿瘤细胞所占的比例均达到60﹪以上,并且取后均立即放在-80℃冰箱冻存.标本来源于中山大学附属肿瘤医院和附属第一医院.2.实验方法:根据HER2/neu和TBP的mRNA序列设计合成特异引物和探针;从组织中提取HER2/neu和TBP的RNA,进行RT-PCR扩增,将扩增产物纯化;分别将两种扩增产物与T载体连接克隆,对重组克隆经过PCR,酶切和序列分析等方法的鉴定无误后制备成阳性定量标准模板,建立荧光定量RT-PCR检测HER2/neu基因表达的方法.收集不同类型的乳腺癌患者的组织标本和正常对照的组织标本,用已建立的荧光定量RT-PCR方法进行检测.最后对该方法的重复性,稳定性进行评价.为准确定量HER2/neu基因mRNA表达量,设定TBP基因为内对照检测其mRNA的表达.每一份样本的HER2/neu基因mRNA均在其TBP表达量的基础上标准化,最后每一份样本HER2/neu的标准化表达量同一份健康对照的标准化表达量相比得到最后相对表达量.3.统计学分析:该实验中计量资料用算术均数(或几何均数)±标准差(x±SD)描述,两种以上均数检验采用t检验,两个独立样本的阳性比率检验和两种方法的独立性检验采用x<2>检验.结论:1.成功建立了荧光定量RT-PCR检测HER2/neu基因表达水平的方法.2.免疫组化检测HER2/neu蛋白表达状态同荧光定量RT-PCR方法检测HER2/neu基因表达状态具有同一性(90.3﹪,P<0.05).3.在20﹪乳腺癌患者中有HER2/neu基因的过表达.4.乳腺癌患者HER2/neu基因的过表达与ER的状态具有相关性.5.荧光定量RT-PCR在检测HER2/neu基因的表达时具有简便,快速,高灵敏度,高特异性,稳定性好,重复性好等特点,而且闭管操作,避免了潜在的污染.同时该方法自动化程度高,可进行高通量的样本检测,具有较好的临床应用前景.