论文部分内容阅读
背景与目的:
缺血性脑卒中的发病率及致残率高,严重危害人类健康,目前尚缺乏有效的防治方法。脑缺血可诱发神经细胞及线粒体损伤,造成缺血后继发性脑损害。抑制细胞凋亡和线粒体损伤是减轻脑缺血损伤的重要手段。有研究提示,Rho激酶抑制剂法舒地尔具有血管调节、减少炎性因子的分泌、抑制炎性细胞的粘附和浸润、参与细胞骨架蛋白重构、维持血脑屏障完整性以及神经元保护等多重作用,可以有效减少脑缺血再灌注后神经功能的损伤。本研究旨在观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞、线粒体及细胞凋亡的影响,并观察其对细胞色素C(Cytochrome C,CytC)和死亡相关蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)的影响,探讨法舒地尔治疗缺血性脑血管病的病理生理机制。
材料和方法:
采用Longa改良线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral arterv occlusion,MCAO)2h再灌注模型。选用清洁级健康雄性SD大鼠随机分为以下各组:假手术组、脑缺血再灌注模型组、生理盐水组和法舒地尔组。法舒地尔组于再灌注同时经腹腔注射药物,剂量15mg/Kg;生理盐水组注射等剂量生理盐水;每日一次,至实验结束。采用HE染色,光镜观察病理学变化;利用透射电镜观察线粒体超微结构的改变;采用免疫组化染色观察CytC和DAPK表达变化;DNA原位缺口末端标记(TUNEL)法观察凋亡细胞;并利用Westernblot检测DAPK表达的变化。结果用均数±标准差(-x±S)表示,成组设计多样本均数的比较用one-wayANOVA检验,P<0.05,差异具有统计学意义。
结果:
1.Rho激酶抑制剂对神经功能的影响:法舒地尔可改善大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经功能评分,与模型组和生理盐水组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。
2.Rho激酶抑制剂对线粒体超微结构的影响:脑缺血后各组大鼠线粒体较假手术组均有不同程度的损伤,出现线粒体嵴紊乱、双层细胞膜结构模糊、核糖体解聚以及细胞水肿现象。其中,24h亚组超微结构损伤最为严重。法舒地尔组与生理盐水组比较,上述损伤较轻。
3.Rho激酶抑制剂对细胞凋亡的影响:法舒地尔组与生理盐水组及模型组相比,1d、3d和7d亚组凋亡细胞数均有明显减少(P<0.01)。模型组3d凋亡细胞数达到最多(P<0.01)。
4.Rho激酶抑制剂对CytC表达的影响:法舒地尔组与生理盐水组相比,1d、3d和7d亚组缺血侧脑组织CytC表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。
5.Rho激酶抑制剂对DAPK表达的影响:免疫组化检测显示法舒地尔组与生理盐水组相比,7d亚组缺血侧脑组织DAPK表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01):Westernblot检测显示法舒地尔组DAPK的表达随着再灌注时间延长而逐渐减少,但与生理盐水组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:
RhO激酶抑制剂法舒地尔可减轻线粒体的损伤,减少细胞凋亡数目,同时抑制CytC及DAPK表达,提示Rho激酶抑制剂可保护线粒体、抑制细胞凋亡,减轻脑缺血后神经损伤,针对Rho激酶进行干预可能是脑缺血治疗的一个新靶点。