小分子化合物诱导小鼠成纤维细胞重编程为多能性干细胞

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoxuemei123
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目的:探讨小分子化合物诱导小鼠成纤维细胞在体外重编程为多能性干细胞的研究。  方法:体外分离培养胎鼠成纤维细胞经小分子化合物诱导为多能干细胞。利用碱性磷酸酶监测、细胞核型分析、免疫组化、RT-PCR等技术确定其具有干细胞性质。  结果:采用七种小分子化合物VPA,CHIR99021,616452,Tranylcypromine,Forskolin,AM580,EPZ004777诱导成纤维细胞形成多潜能干细胞的过程中,细胞诱导前期经历了一个类胚外内胚层(XEN,Extraembryonic endoderm cells)的中间阶段。该细胞系在诱导过程首先形成上皮样细胞克隆,这些上皮细胞样细胞表达胚外内胚层细胞标志性蛋白如SALL4,GATA4,SOX17并在进一步诱导过程中形成胚胎干细胞样克隆,并表达SOX2,OCT4,NANOG等胚胎干细胞标志性蛋白。该细胞系碱性磷酸酶阳性,证明细胞处于未分化状态,具有干细胞性质。  结论:  1、小分子VPA,CHIR99021,Forskolin,EPZ004777,AM580,Tranylcy,Promine可将小鼠成纤维细胞诱导形成多潜能干细胞。  2、在化学诱导成纤维细胞重编程的过程中细胞首先经历一个XEN的中间态,随后又形成多能干细胞。  3、全化学诱导小鼠成纤维细胞重编过程,没有Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc转录因子参与,克服转录因子诱导iPS的安全问题,使得诱导效率提高了近1000倍。
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