根霉纤溶酶液态发酵、分离纯化和酶学性质研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:Jany9538235
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
血栓性疾病严重威胁人类生命和健康,近年发病率有增加趋势。溶栓疗法是血栓性疾病安全且有效的手段。目前临床使用的溶栓药物主要是纤溶酶原激活剂类,尽管这些药物的疗效肯定,但还存在许多缺陷,而且价格昂贵。因此研制高效、快速、价廉的新型溶栓药物的需求迫切。 本论文对根霉Rhizopus chinensis YY-15液体摇瓶发酵产生纤溶酶的工艺条件进行了优化,建立了该菌株发酵产生纤溶酶的制备分离纯化方法,研究了该菌株产生纤溶酶的部分酶学性质。 优化了根霉Rhizopus chinensis YY-15菌株产纤溶酶液体摇瓶发酵条件。首先对发酵培养基进行了优化,运用单因素实验法研究了不同碳源、不同氮源、不同碳氮比例、不同培养基初始pH对菌株发酵产生纤溶酶的影响,确立了培养基各组成成份的适宜水平。进一步采用正交实验对菌株发酵产生纤溶酶的发酵时间和接种量进行了优化。结果表明,麸皮和豆粕是该菌株液体发酵产生纤溶酶的适合碳源和氮源。实验范围内的最适培养基组成是:麸皮浓度3%(w/v),豆粕浓度5%(w/v),培养基初始pH5.0。适宜接种量6%,培养时间72h。根霉Rhizopus chinensis YY-15在优化条件下液体摇瓶发酵平均产酶量为98.31U/ml(尿激酶单位)。 对根霉Rhizopus chinensis YY-15产生纤溶酶的制备分离纯化工艺进行了探索和研究,建立了酶的分离提纯工艺。根霉液体发酵液中的纤溶酶用40%~70%饱和度硫酸铵分步盐析、Phenyl Sepharose Fast Flow疏水相互作用色谱、DEAE-Sepharose FF离子交换色谱和Sephacryl S-100凝胶过滤色谱顺序分离后,可得到经高分离度的疏水相互作用色谱Resource Phe证明为均一的纤溶活性组分。用上述流程将纤溶酶提纯了90.5倍,活力回收46.5。 对用上述流程提纯的纤溶酶的部分性质进行了研究。凝胶层析方法测定根霉纤溶酶分子量为20.3kDa。等电聚焦方法测定该酶等电点8.2。纤溶酶比活力2416.86U/mg。纤溶酶最适作用温度50℃,37℃保温4h酶活力保持88%,43℃和50℃保温4h酶活力保持57%和32%,60℃保温1h酶活力保持53%。纤溶酶最适作用pH为8.8,最稳定的pH范围是6.8~8.8,在该pH范围内,37℃保温24h,酶活力保存80%以上。酶的pH稳定性很好。酶与氨基酸侧链修饰试剂在37℃保温30min后,EDTA、PMSF和Aprotinine对纤溶酶有抑制作用,而且随着抑制剂浓度的增大,其抑制作用也增加;而抑制剂PCMB、Lys和TPCK对该纤溶酶无明显的抑制作用。初步可以判定金属和丝氨酸位于或临近该纤溶酶的活性中心。 根据已确定的该纤溶酶的酶学性质可以肯定,根霉Rhizopus chinensis YY-15液态发酵产生的纤溶酶是一种新的纤溶酶。该酶的优点是分子量相对较小,比活力较高,温度和pH稳定性好。该酶具有潜在的应用前景。本文的研究工作为该酶的进一步酶学性质和医学实验研究奠定了基础。
其他文献
<正>党的十八大报告首次将生态文明建设列入到中国特色社会主义事业总体布局,指出建设生态文明,是关系人民福祉、关乎民族未来的长远大计。明确了经济建设、政治建设、文化建
随着互联网在国内的飞速发展,不仅个人开始开通私人微博,政府机构和官员也纷纷开通政务微博。微博的发展为社会主义民主政治的实现、创新社会管理拓宽了渠道,也使微博问政应
柬埔寨华文教育直到20世纪90年代柬华理事总会成立之后,才又焕发生机、蓬勃发展。但由于历史的断代和教育资源的落后,柬埔寨的华文教育仍存在着诸多问题。要在柬埔寨华教社团
随着经济全球化的不断推进,企业面临越来越激烈的竞争。中国的发电企业,在各种内外因素的困扰下,经营形势日趋严峻,五大发电集团之间及五大发电集团与其它发电集团之间的竞争
在现代社会的经济发展中,随着企业不断拓宽全球化发展战略,企业所面临的经营环境也发生着日新月异的变化,企业发展战略的制定和管理也已成为企业在激烈的市场竞争中能否取得
我国创新型人才研究经历了三个阶段,在创新型人才界定、创新型人才价值、创新型人才成长环境等方面取得一定的理论成果。国外对创新型人才问题的研究,是随着人力资源管理研究
背景和目的:糖尿病是一种慢性、低度炎症性疾病。COX-2作为重要的炎症介质,通过与炎症因子相互作用,对组织产生作用,促进糖尿病和糖尿病并发症的发生和发展。COX-2基因启动子
目的探讨牙源性上颌窦炎不同治疗方法的效果和意义。方法选取我院接诊的76例牙源性上颌窦炎患者作为手术对象,依据手术方式的差异加以分组,实验组39例,采用鼻内镜低温等离子
当今社会,电子信息数量急剧增长。对信息的浓缩和查询等问题的研究工作显得尤为重要。自动文摘可以降低人工文摘的成本,缩短文摘加工和处理时间,为用户快速、准确和廉价的获
由美国次极债引发的金融风暴席卷全球,在这动荡的宏观经济背景下,P2P网络借贷模式作为微金融运营模式的创新,满足于小微企业和个人的小额贷款需求是传统的正规金融体系的有效