本课题的主要内容是川牛膝质控成分分析和有效部位活血药效评价研究,主要研究内容如下:1.川牛膝质控成分分析研究（1）建立川牛膝的高效液相（HPLC）色谱指纹图谱通过优化流动相、洗脱梯度、流速、柱温及供试品制备方法等条件,筛选出最优的川牛膝HPLC指纹图谱条件;并对色谱条件进行方法学考察,成功建立了不同批次川牛膝和怀牛膝的HPLC色谱指纹图谱。对指纹图谱中的色谱峰进行校正后,川牛膝指纹图谱共确立了 27个共有峰,怀牛膝指纹图谱共确立了 16个共有峰。通过对比分析川牛膝和怀牛膝药材的指纹图谱,发现两者的指纹图谱有较大差异,因此需要进一步研究控制二者质量的指标性成分。（2）川牛膝和怀牛膝HPLC-ESI-MS分析应用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）和标准品比对,对川牛膝和怀牛膝中的化合物进行鉴定。共从川牛膝中检测出64个化合物,其中11个甾酮类化合物,26个皂苷类化合物;从怀牛膝中检测出39个化合物,其中12个甾酮类化合物,17个皂苷类化合物。川牛膝和怀牛膝中皂苷类成分相似,多为三萜皂苷类化合物,但含量较高的甾酮类成分的保留时间有显著差异。甾酮类和皂苷类化合物可能在川牛膝和怀牛膝的质量控制上起着重要作用。（3）高效液相色谱指纹图谱结合化学计量学分析川牛膝质量成分将不同批次的22批川牛膝药材建立指纹图谱,利用相似度分析（SA）、聚类分析（CA）和主成分分析（PCA）发现川牛膝不同批次间的差异和控制川牛膝质量的指标性成分,最终认定化合物 24-Hydroxycyasterone、Cyasterone、Isocyasterone、Precyasterone、Chikusetsusaponin Ⅳ、Chikusetsusaponins Ⅳa、Zingibroside R1、3-O-Rha-（1→3/4）-Glc-28-O-Glc hederagenin 对川牛膝的质量有较大影响。而β-Ecdysone、25R-Inokosterone、25S-Inokosterone、Chikusetsusaponin Ⅳ、Chikusetsusaponins Ⅳa 和 3-O-β-D-Glucopyranosyl oleanolic acid 对怀牛膝的质量影响较大。结果表明二者质控成分之间有较大的差异,为川牛膝和怀牛膝的规范应用和质量标准的修订提供依据。2.川牛膝及有效部位药效评价研究（1）川牛膝及各溶剂部位体外抗氧化活性评价用紫外分光光度法测定川牛膝不同溶剂部位的DPPH·、羟基自由基、超氧阴离子清除能力和铁还原能力。结果发现,川牛膝总提取物、正丁醇部位和80%醇沉部位具有较好的自由基清除活性,且呈显著的量效关系。（2）川牛膝及有效部位对急性血瘀模型大鼠的影响采用皮下注射盐酸肾上腺素加冰水浴建立大鼠急性血瘀模型,以全血黏度、血浆黏度、IL-6、TNF-α NO、COX-2指标评价川牛膝及其有效部位的活血作用。结果川牛膝及其有效部位各剂量组均能不同程度的改善急性血瘀模型大鼠的全血黏度和血浆黏度,降低血浆IL-6、TNF-α、NO、COX-2水平。（3）川牛膝有效部位化学成分分析采用HPLC-ESI-MS技术,分析川牛膝正丁醇部位化学成分,从川牛膝正丁醇部位鉴别出40个化合物,其中主要是甾酮类和三萜皂苷类化合物。3.Cyasterone 和 Chikusetsusaponin Ⅳ 的活性评价研究采用凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤模型,以TXA2、ET、MDA、COX-2、eNOS和SOD为评价指标,研究川牛膝正丁醇部位的两个代表性成分Cyasterone 和 Chikusetsusaponin Ⅳ 的活性。结果表明 Cyasterone 和 ChikusetsusaponinⅣ各剂量组能够不同程度抑制凝血酶刺激下的HUVECs中TXA2、ET、COX-2和MDA 的产生,促进 SOD 和 eNOS 活性。其中 Cyasterone（100 μM）对 COX-2、ET 活性的抑制和对SOD活性的促进作用强于Aspirin（100 μM）。