蜂胶对酒精性抑郁障碍小鼠脑—肠功能损伤的改善作用研究

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目的本研究建立酒精暴露抑郁障碍小鼠模型,探讨蜂胶对其抑郁样行为及脑-肠功能损伤的改善效果及作用机制。方法1.酒精性抑郁障碍小鼠模型建立方案及干预策略:30只10周龄雄性C57 BL/6J小鼠置于同一动物饲养笼中适应性喂养1周,随机分为3组(10只/组),对照组、模型组和蜂胶组,每只老鼠单笼饲养。每周一至周四上午8时至下午4时给予模型组和蜂胶组小鼠新鲜配制的15%乙醇水溶液自由饮用,下午4时至次日上午8时给予其自来水自由饮用,对照组小鼠全天给予自来水自由饮用;周五、六切断3组小鼠一切水源;周日给予3组小鼠自来水自由饮用。各组小鼠全程自由进食,并于每日中午12:00进行灌胃,其中健康对照组与酒精模型组小鼠给予0.2 m L/只大豆油灌胃,蜂胶干预组小鼠给予120 mg·kg-1蜂胶灌胃。3组小鼠的饲养房间均保持标准光照强度,于每日上午8时至下午4时给予光照,下午4时至次日上午8时剥夺光照。每周测定小鼠体重和进食量。2.行为学实验:采用糖水偏好实验、旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验评价小鼠的抑郁样行为。3.利用苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色观察小鼠海马组织CA3区以及十二指肠、空肠、回肠和结肠的病理学改变。4.利用透射电镜、免疫荧光和示踪实验进行小鼠空肠和结肠的通透性分析。5.利用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠血清中脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、多巴胺(Dopamine,DA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HA)、内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)、肠型脂肪酸结合蛋白2(Intestinal fatty acid binding protein,FABP2)以及脾脏组织中肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)等细胞因子的水平。6.利用免疫印迹实验(Western blot,WB)检测小鼠空肠、结肠组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1、Rho A、AMPK、p-AMPK、LKB和p-LKB等蛋白表达水平。结果1.酒精暴露的10周内,模型组小鼠进食量和生长速度普遍低于对照组和蜂胶组。2.在旷场实验中,三组小鼠的总运动距离没有显著差异,但模型组小鼠在中央区域运动时间较其他两组显著缩短。此外,与对照组相比,模型组小鼠在酒精暴10周后12 h糖水偏爱度显著下降(P<0.05);高架十字迷宫实验中进入开放臂的时间和次数都显著减少(P<0.05);强迫游泳实验中不动时间显著增加(P<0.05)。蜂胶干预后,上述抑郁样行为较模型组明显改善。3.与对照组相比,模型组小鼠海马CA3区出现部分神经细胞损伤;蜂胶干预后,神经细胞损伤得到一定程度改善。模型组小鼠血清中BDNF和多巴胺等因子的表达水平明显低于正常对照组(P<0.05),而其在蜂胶组中的含量明显高于模型组(P<0.05)。4.与对照组相比,模型组小鼠空肠和结肠出现部分病理学损伤,肠道通透性增大,而蜂胶干预减轻了酒精诱导的小鼠肠黏膜屏障病理损伤和透性渗漏。5.Western blot实验结果表明,蜂胶的干预可通过提升空肠和结肠组织中重要组分Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白的表达(P<0.05)以及激活LKB1/AMPK信号通路来修复黏膜损伤。6.模型组小鼠血清中LPS、FABP2以及脾脏匀浆中TNF-α,IL-6和IL-18等炎症相关细胞因子的水平明显高于正常对照组(P<0.05),经过蜂胶干预后,其水平显著降低。结论1.酒精暴露可以引起C57 BL/6J小鼠抑郁障碍,表现出典型的抑郁样行为和病理生理学改变。2.蜂胶作为一种重要的营养物质,可以有效预防和缓解酒精暴露小鼠的抑郁障碍症状及相关病理生理学损伤,其作用机制可能与蜂胶对酒精性抑郁障碍小鼠脑-肠功能的修复改善作用有关。
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