背景与目的胰腺癌是一种侵袭性极高的消化道肿瘤,其发病隐匿,诊断明确时往往已处于中晚期,并且治愈率极低,5年生存率仅有1-4%,预后差[1]。目前尚未发现一种能够准确判断胰腺癌的标志物。因胰腺癌恶性程度极高,且临床的诊治手段目前效果均不佳,我们迫切需要发展诊治该肿瘤的新方法。随着分子生物学理论及技术的发展,在此领域内探讨胰腺癌的发病机理和探求新的诊断和治疗手段成为最近期间的热点。有最新研究表明胰腺癌的病程演化至少经历了20余年[2],如果能早于临床影像学提早诊断出胰腺癌,在早期就对其发展进行干预,将有可能从根本上使胰腺癌的治疗和预后得到一定程度的改观。目前据有关文献报道[3],许多种肿瘤标志物将被用于胰腺癌的诊断,但其特异性和敏感性都不太理想,尤其对于早期诊断意义较小。专家们对胰腺癌的研究,主要集中于在胰腺癌早期发病时发生变化的特殊的标志物方面及对分子生物学的研究方面。对于基因芯片技术,研究者可以进行多基因联合检测,可以提供新的方向在基因的诊断上;也可以快捷、高效地分析基因在胰腺癌标本中表达所具有的潜在价值,从而使它们在诊断疾病、判断预后以及制定治疗方案方面的应用价值得到确定[4]。随着国内外研究人员对恶性肿瘤越来越多的了解,发现miRNA(微小RNA)就是一种小分子,它与多种肿瘤的发生、发展关系密切。最近几年来,研究人员越来越重视对非编码RNA的研究,发现miRNA是一种很重要的非编码RNA;miRNAs由大小约21-23个碱基的单链小分子组成,是由Dicer酶加工单链RNA而成,而此单链RNA是由具有大约70个-90个碱基大小发夹结构组成[5-6]。Lin-4和let-7是最早发现的miRNA,最早发现于线虫中,随后在果蝇、植物、人类等多种生物中也逐渐发现和鉴别出数百种miRNA。在研究过程中,专家们发现miRNA与肿瘤的发生、发展有着密切的联系,大量研究表明[7],micro RNA调节靶基因的方式是抑制或降解靶基因miRNA的翻译来完成的;参与调节很多种生物学信号通路。miRNA参与到生命活动的各个环节,从细胞的生成到蛋白质的合成、能量的代谢,以及我们人体神经的传递等。因此寻求一种敏感性和特异性均相对较高的标志物将对胰腺癌的早期诊断和预后的判断产生重大意义。对miRNA进行深入的研究,有助于我们对癌症的提前的诊断,并且在疾病发现后进行积极有效的治疗上有很大的帮助。有研究发现[8-10]miR216a在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等发病中起着重要的作用,而在胰腺癌中研究较少。有研究提示miR216a在胰腺癌中属于抑癌基因,本研究主要针对胰腺癌组织及癌旁组织,验证micro RNA-216a及其靶基因JAK2、CSK在胰腺癌中的作用机制及临床意义。目的通过检测胰腺癌、癌旁正常石蜡包埋组织中miR216a的表达,检测miR216a的作用靶基因JAK2、CSK的蛋白表达水平,探讨miR216a及JAK2、CSK蛋白表达水平与临床病理特征的关系,及其相关性。方法收集郑州大学第一附属医院2011年3月至2014年11月间因胰腺癌行手术切除的石蜡包埋组织45例,并收集癌旁正常组织45例作为对照。按照3um厚度切片3um,HE染色,病理组织学诊断均为胰腺导管腺癌,所有病例术前均未接受放、化疗。应用锁定核酸原位杂交法测定64例胰腺癌及其配对的癌旁正常组织中miR216a的表达情况,免疫组织化学法检测JAK2、CSK蛋白的表达情况,并分析三者之间的相关性,及其各自与胰腺癌临床病理指标的关系。采用SPSS17.0进行统计学分析,miR216a、JAK2、CSK三者之间的关系应用Spearman相关分析法,检验水准a=0.05,P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.锁定核酸原位杂交法显示miR216a阳性染色呈蓝色,定位于细胞浆或细胞核,在胰腺癌组织中多为弱阳性(附图ABC);miR216a在胰腺癌组织中的阳性表达率为37.8%(17/45),在癌旁正常组织的阳性表达率为71.1%(32/45),差异具有统计学意义(c2=10.080,P<0.05);免疫组化法显示JAK2蛋白染色均定位于胞浆,阳性染色为呈棕黄色或棕褐色(附图DEF),JAK2蛋白在胰腺癌组织、癌旁正常组织中蛋白的阳性表达率分别为60%(27/45)、35.6%(16/45)),差异具有统计学意义(c2=5.388,P<0.05);免疫组织化学法染色显示CSK蛋白染色均定位于胞浆,阳性染色为呈棕黄色或棕褐色(附图GHI),在胰腺癌组织中及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为17.8%(8/45)、73.3%(33/45),差异仍具有统计学意义(c2=27.999,P<0.05)。miR216a的表达水平与胰腺癌的TNM分期有关,而与患者性别、年龄、肿瘤分化的程度,局部淋巴结的转移、远处的转移无关(P>0.05);JAK2蛋白、CSK蛋白的表达均和胰腺癌的分化程度有关系,而与患者年龄、性别、TNM分期,局部淋巴结转移、远处转移无关(P>0.05)。2.miR216a在胰腺癌TNM I-II期、TNM III-IV期的阳性表达率为34.8%(8/23),9.1%(2/22),差异有统计学意义(P<0.05);miR216a的表达与患者的性别、年龄、分化程度、门静脉或腹腔神经侵犯、有无淋巴结转移无关。JAK2在高、中、低分化胰腺癌细胞中的阳性表达率分别为20%(1/5)、68.9%(20/29)、81.8%(9/11);CSK在高、中、低分化胰腺癌细胞中的阳性表达率分别为80%(4/5)、20.7%(6/29)、27.2%(3/11),差异均具有统计学意义(均P<0.05)。JAK2、CSK与胰腺癌患者的性别、年龄、TNM分期、门静脉或腹腔神经侵犯、有无淋巴结转移无关。(表2)3.spearman相关性分析显示,miR216a在胰腺癌组织中的表达水平与JAK2呈负相关(r=-0.436,P<0.05),miR216a在胰腺癌组织中的表达水平与CSK呈正相关(r=0.223,P<0.05),JAK2与CSK在胰腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.443,P<0.05)。结论1.miR216a在胰腺癌组织中表达下调,JAK2在胰腺癌组织中表达上调,CSK在胰腺癌组织中表达下调,miR216a可能通过靶向调节JAK2、CSK的表达,对胰腺癌的发病起到一定的抑制作用。2.miR216a与胰腺癌TNM分期相关,胰腺癌的TNM分期越高,miR216a表达越低;JAK2与胰腺癌的分化程度存在一定的关系,JAK2蛋白表达水平越高,胰腺癌的分化程度越低,胰腺癌的恶性程度越高;CSK蛋白与胰腺癌的分化程度有关系,CSK蛋白表达越低,胰腺癌的分化程度越低,胰腺癌的恶性程度越高。3.miR216a的表达与JAK2蛋白呈负相关,而与CSK蛋白表达呈正相关。