论文部分内容阅读
背景:血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)是PC抗凝系统的重要成员。EPCR是一种膜蛋白,当它从细胞膜上脱落时,可引起抗凝系统功能障碍。此外,EPCR还参与许多其他病理过程,例如抗炎,抗凋亡,自身免疫和癌症。因此,EPCR脱落的研究是有意义的。香芪汤是一种中药复方,主要由香附,黄芪和穿心莲组成。在我们课题组以前的动物模型研究中,我们发现香芪汤及其有效成分可以抑制EPCR脱落,但具体的分子机制没有得到充分的阐释。目的:在人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)中建立佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)诱导的EPCR脱落模型,研究香芪汤及其主要活性成分对EPCR脱落的抑制作用。方法:用不同浓度的PMA处理HUVECs,利用Western blotting的方法检测细胞中EPCR的表达情况,通过ELISA检测培养上清液中脱落的EPCR含量,从而筛选出PMA的最佳浓度。然后,通过Western blotting的方法进一步检测调控EPCR脱落的因子TACE,MAPKs和PKC同工酶的蛋白质水平。基于上述数据,建立EPCR脱落模型。在此模型中,用香芪汤或其主要活性成分预处理细胞,研究这些药物对EPCR脱落的作用机制。结果:我们发现用2μMPMA处理1小时HUVECs可以最大程度地释放EPCR,并且还可以诱导MAPK磷酸化和PKC的易位以及磷酸化,提示EPCR的脱落与MAPK、PKC信号途径有关。香芪汤可以抑制HUVEC中EPCR脱落,进一步研究发现,香芪汤的三种主要活性成分单体可以通过不同途径抑制EPCR脱落。α-香附酮通过防止PKC易位抑制EPCR脱落;黄芪甲苷可下调MAPK和PKC的磷酸化抑制EPCR脱落;穿心莲内酯通过减少MAPK的磷酸化,抑制EPCR脱落。结论:在本研究中,我们在HUVEC中建立了 PMA诱导的EPCR脱落模型。另外,我们验证了香芪汤在HUVECs中抑制EPCR脱落的功能,并发现其主要有效成分α-香附酮,黄芪甲苷和穿心莲内酯可以通过不同途径抑制EPCR的脱落。这些结果揭示了香芪汤抑制EPCR脱落的分子机制,并且为未来治疗EPCR相关疾病提供了理论基础和实验数据。