生物脱硫中氧化亚铁硫杆菌的固定化及培养基优化研究

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利用含Fe3+离子的氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)菌液脱除混合气体中的硫化氢,是目前H2S脱除技术的一个研究热点。该工艺一般分为三部分:脱硫、再生和硫磺分离。在再生反应器中,氧化亚铁硫杆菌催化硫酸亚铁氧化为硫酸铁,该反应器的连续、快速进行是整个工艺确立的关键。本文基于该工艺的特点,旨在通过不同的固定化方法来增大细胞密度,从而得到较高的生产能力,为后续的连续化操作提供条件。本文分别从固定化方法、培养基优化和反应器三方面进行了研究。以海藻酸钙为载体,采用包埋方法对实验室保存活化后的T.f菌进行了固定化研究。在海藻酸钠浓度为2%(W/V)时,基质硫酸亚铁在凝胶内的扩散速率相对较快,通过回归方程计算出其扩散系数为2.183×104 cm2·min-1;而氯化钙浓度对扩散影响不大。在海藻酸钠浓度为2%(W/V),氯化钙浓度为4%(W/V)的情况下,分析了初始铁离子浓度、活性炭添加量和磷酸氢二钾浓度对Fe2+氧化速率的影响。结果表明,在初始包埋量为15 g细胞湿重/L凝胶液的情况下,当初始铁浓度为5 g╱L时,完全氧化所需时间最短为50 h,氧化速率最快为0.27g·L-1·h-1;初始铁浓度为8 g/L和10 g/L时,完全氧化所需时间相同为60 h。活性碳的添加在一定程度上加快了T.f菌的氧化速率,二次转接后最高氧化速率由0.55 g·L-1·h-1升高到0.78 g·L-1·h-1。而磷酸氢二钾会加快Fe3+的水解生成铁钒类沉淀,阻塞海藻酸钙凝胶的孔道,导致载体使用周期变短。为了减少培养过程中产生的沉淀,分析了培养基初始pH值和各营养成分的影响。研究表明,当pH值高于1.6时,随着培养基初始pH值的提高,氧化速率基本维持稳定,而生成的沉淀量逐渐增多;最佳pH值为1.8。考察不同氮源(NH42HPO4、NH4Cl、NH4NO3和(NH42SO4对Tf菌培养过程的影响发现,最佳氮源为(NH42HPO4,相对9k培养基而言(沉淀量1.18 g·L-1),不但可使Fe2+的氧化速率维持稳定,而且产生的沉淀量也最少(0.78 g·L-1)。(NH42HPO4浓度的影响实验表明,随着浓度的降低,Fe2+的氧化速率变化不大,而生成的沉淀量逐渐减少;当(NH42HPO4浓度为0.5 g·L-1时,培养过程中几乎没有沉淀。确定最佳培养基为:(NH42HPO4 0.5 g/L,CANO3 0.01 g╱L,KCl 0.1 g╱L,MgSO4 0.2 g╱L,FeSO4·7H2O 44.3 g/L。为了提高T.f菌的氧化能力,以木屑为固定化填料,在固定床生物反应器中培养T.f菌。间歇培养实验结果表明:当气速为0.4 L/min,初始铁浓度为10g╱L时,固定化后Fe2+的平均氧化速率由0.4 g·L-1·h-1升高到1.0 g·L-1·h-1;同时载体尺寸越小,孔隙率越小,比表面积越大,吸附菌体数越多,Fe2+的氧化速率也越大,平均氧化速率升高到2.36 g·L-1·h-1。气速实验表明,随着气速的增加,Fe2+的氧化速率也逐渐增大,当气速为1.4 L/min时,Fe2+的平均氧化速率高达4.86g·L-1·h-1。连续实验结果表明,在达到最佳稀释率之前,随着稀释率的提高,Fe2+的氧化速率也逐渐提高,而转化率却逐渐降低。将载体尺寸变小后,最高氧化速率由1.68 g·L-1·h-1提高到5.68 g·L-1·h(-1)。
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