【摘 要】
：
目的:本课题拟筛选出USP15高表达的肝癌细胞株,用siRNA干扰USP15基因表达,检测干扰前后USP15蛋白表达水平变化,并针对肝细胞癌中USP15基因及TGF-β信号通路的表达情况进行分析,进一步分析USP15基因对TGF-β信号通路的影响,探讨USP15是否可以通过稳定活化TGF-β信号通路进而在肝细胞癌的发生发展中起到重要的作用,以及在这一过程中的具体机制。方法:1.运用实时定量RT-P
论文部分内容阅读
目的:本课题拟筛选出USP15高表达的肝癌细胞株,用siRNA干扰USP15基因表达,检测干扰前后USP15蛋白表达水平变化,并针对肝细胞癌中USP15基因及TGF-β信号通路的表达情况进行分析,进一步分析USP15基因对TGF-β信号通路的影响,探讨USP15是否可以通过稳定活化TGF-β信号通路进而在肝细胞癌的发生发展中起到重要的作用,以及在这一过程中的具体机制。方法:1.运用实时定量RT-PCR和Western blot法分别检测多种肝癌细胞株（Hep G2、MHCC-97H、MHCC-97L、SMMC-7721）和正常肝细胞株（L02）的USP15 m RNA的转录水平及USP15的蛋白表达水平,筛选出USP15高表达的肝癌细胞株;2.运用siRNA干扰USP15基因表达,运用Western blot法检测干扰前后USP15蛋白的表达水平的改变;3.运用siRNA干扰USP15基因表达,运用MTT法检测下调USP15表达后对HCC细胞增殖能力的影响;4.运用siRNA干扰USP15基因表达,运用Caspase3/7活性分析实验检测下调USP15表达后对HCC细胞凋亡情况的影响;5.运用Western blot法检测下调USP15的表达对SMAD2的磷酸化水平和TGF-β信号通路的活化的影响,并探讨USP15表达情况、SMAD2的磷酸化水平以及TGF-β信号通路活化情况,这三者之间的联系。结果:1.根据实时定量PCR的结果分析,与正常肝细胞L02相比,USP15 m RNA在所有HCC细胞系中表达明显上调（P＜0.05）,差异有统计学意义。此外,MHCC-97H中的USP15 m RNA的表达量明显高于Hep G2、MHCC-97L、SMMC-7721这3种HCC细胞系中的USP15 m RNA的表达量,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.Western blot检测结果显示,与正常肝细胞L02相比,USP15蛋白在所有HCC细胞系中表达明显上调（P＜0.05）,差异有统计学意义。此外,MHCC-97H中的USP15蛋白的表达量明显高于Hep G2、MHCC-97L、SMMC-7721这3种HCC细胞系中的USP15蛋白的表达量（P＜0.05）,差异有统计学意义。3.Western blot检测结果显示,与Control-siRNA转染的MHCC-97H细胞中的USP15蛋白的表达量对比,USP15-siRNA转染后的MHCC-97H细胞中的USP15蛋白的表达量明显下降（P＜0.05）,差异有统计学意义。4.以MHCC-97H细胞作为研究模型,MTT法分别对转染了USP15-siRNA实验组和转染了Control-siRNA对照组的MHCC-97H细胞的增殖能力进行检测,结果提示下调USP15的表达显著降低了MHCC-97H细胞的增殖能力（P＜0.05）,差异有统计学意义。5.通过Caspase3/7活性分析实验分别对转染了USP15-siRNA实验组和转染了Control-siRNA对照组的MHCC-97H细胞的凋亡情况进行分析,Caspase3/7活性分析实验表明下调USP15表达能够显著诱导MHCC-97H细胞凋亡（P＜0.05）,差异有统计学意义。6.通过Western blotting检测对转染USP15-siRNA实验组和Control-siRNA对照组的MHCC-97H细胞的USP15表达水平、SMAD2的磷酸化水平及TGF-β信号通路活化情况进行分析,结果表明下调USP15表达,能够显著降低SMAD2的磷酸化水平,抑制TGF-β信号通路活化（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论:USP15在肝癌细胞中呈明显的高表达,能促进肝癌细胞MHCC-97H的增殖而减少凋亡,具有的明显促癌作用。USP15可以调节磷酸化SMAD2的数量,进而激活TGF-β信号通路促进肝细胞癌的发生发展。USP15很有可能是肝细胞癌中一个新的靶点,能为肝细胞癌的靶向治疗提供新的方向。
其他文献
目的:经颈静脉肝内门体静脉分流术（TIPS）现已用于预防合并门静脉血栓的肝硬化患者再出血,但相关临床证据较少。本荟萃分析旨在评估TIPS在预防合并门静脉血栓的肝硬化患者再出血方面的可行性、有效性和安全性。方法:通过预先定义的检索词共同系统地检索Pub Med、Cochrane Library、EMBASE和Web of Science电子数据库的相关文献,根据预先设定的纳入及排除标准筛选相关研究。
目的:观察比较恩替卡韦（ETV）与替诺福韦（TDF）在单药治疗慢性乙型肝炎（CHB）肝硬化患者中对肝癌（HCC）发病率影响的差异,并进一步比较两种药物对不同程度肝硬化发生HCC影响的差异,同时纳入随访过程中记录的肝脏硬度值（LSM）,以此评估其预测HCC的诊断效能。方法:回顾性分析从2017年1月开始在赣州市第五人民医院门诊和住院部分别使用ETV与TDF抗病毒治疗的慢性乙型肝炎肝硬化患者临床资料,
目的:主动脉夹层虽不属于常见病,但一旦发生致死率极高。现收集赣南医学院第一附属医院单中心回顾性研究资料,同时联合循证医学的方法来评价B型主动脉夹层（Type B aortic dissection,TBAD）患者采用经皮股动脉穿刺缝合术（Percutaneous endovascular aneurysm repair,PEVAR）或股动脉切开术（Endovascular aortic repai
背景:小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）是肺癌的一种病理类型,占所有肺癌组织类型的15%左右,临床上主要表现为疾病进展快、肿瘤倍增时间短、早期极易发生远处转移、约2/3的SCLC患者在首次就诊时就处于广泛期。目前广泛期小细胞肺癌（extensive-stage small cell lung cancer,ES-SCLC）最主要的一线治疗方式仍然是以铂类为基础的联
目的:先天性心脏病相关性肺动脉高压（Congenital heart disease-asociated pulmonary arterial hypertension,CHD-PAH）是我国最常见的肺动脉高压临床类型,早期诊断困难,预后很差。本研究的目的是使用转录组测序（RNA-sequencing,RNA-Seq）技术分析CHD-PAH患者外周血单个核细胞（peripheral blood m
目的:临床中发现面部婴幼儿血管瘤患儿口服普萘洛尔疗效存在差异,引起差异的因素尚不明确,本研究通过回顾性的收集口服普萘洛尔治疗面部血管瘤的相关资料,根据性别、血管瘤的分型、开始服药时间、服药时长、血管瘤的区域及位置及危险程度等因素进行分组,探讨可能影响面部IH婴幼儿血管瘤患者口服普萘洛尔疗效的因素。方法:回顾性收集2017年5月1日至2020月5月1日就诊于赣南医学院第一附属医院面部IH患儿资料,并
目的:本研究通过观察瘤体内注射平阳霉素治疗婴幼儿血管瘤的疗效及不良反应并分析其相关影响因素,为一线治疗效果不佳的婴幼儿血管瘤采用该疗法提供一定的指导意见,并为临床提高该疗法安全性提供一定的参考依据。方法:对2019年6月至2021年6月期间就诊于赣南医学院第一附属医院小儿外科住院治疗的婴幼儿血管瘤患儿进行回顾性分析。根据纳入标准和排除标准筛选出住院行瘤体内注射平阳霉素的41例血管瘤患儿。详细记录患
目的:家族性高胆固醇血症（FH）是一种血脂紊乱的遗传疾病,容易加快人体全身的血管动脉粥样硬化的进程。此研究目的为初步了解赣南地区家族性高胆固醇血症的突变基因和临床特点,以期为今后在临床工作中开展FH筛查提供基础。方法:收集2020年8月至2021年12月在第一附属医院心内科门诊或住院部低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）＞3.4mmol/L的患者,纳入40例符合标准的患者,收集患者的临床资料,包括性别、
目的:髂股静脉狭窄或闭塞是血管外科常见病之一,腔内治疗已成为该疾病首选治疗方式。但在传统球囊扩张成型（plain old balloon angioplasty,POBA）和支架植入何种治疗方式更优,支架的选择等问题上仍存在争议。本课题通过对比三种不同腔内治疗方式的临床疗效,旨在为腔内治疗症状性髂股静脉狭窄或闭塞提供更多临床证据。方法:将2011年1月至2021年6月期间赣南医学院第一附属医院血管
目的:研究Notch1信号在构建组织工程心脏瓣膜（tissue-engineered heart valves,TEHV）中发挥的作用,然后,通过细胞实验进一步探究其发挥作用的机制。方法:1、使用含VEGF和FGF的内皮细胞诱导培养基对脂肪间充干细胞（Adipose-Derived Stem Cells,ADSCs）进行定向诱导分化,通过观察细胞形态、蛋白免疫印迹实验检测v WF的表达以及成管实验