犬瘟热病毒SY-12株的分离鉴定及其全基因组序列测定与分析

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犬瘟热(Canine distemper, CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)感染引起的烈性传染病,其高致病性、高死亡率,严重危害我国犬业、毛皮动物养殖业与野生动物保护业。虽然已有犬瘟热的疫苗问世,但是犬瘟热病毒具有易变异的特点,现有的疫苗很难控制犬瘟热的发生,因此开展对新出现的犬瘟热病毒进行遗传变异规律等相关研究对于该病的防治具有十分重要的意义。本研究包括两部分内容:貉源犬瘟热病毒的分离鉴定和该病毒全基因组序列测定与分析。本研究选取来自吉林省松原市某养殖场疑似发生犬瘟热病的貉子的肺脏、肝脏等组织病料,研磨上清接种非洲绿猴肾细胞(Vero)进行病毒的分离。对分离毒株进行了形态学、血清学、动物回归试验鉴定,并用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测发病动物体内组织和感染细胞中的病毒核酸。分离得到的病毒在Vero细胞上可产生明显的细胞病变(CPE),病毒形态学、血清学、动物回归试验、RT-PCR鉴定均为阳性,确定所分离的病毒为犬瘟热病毒,命名为CDV SY-12株。本病毒的分离鉴定有助于我们更深入的了解犬瘟热病毒在貉群体内的流行情况。对貉源CDV SY-12株进行全基因组序列测定与分析,以阐明该毒株的基因遗传变异特征。将SY-12株全基因组分9段,以RT-PCR进行扩增、连接转化并测序,拼接得到CDV SY-12株的全基因组cDNA。用相应生物学软件对SY-12株全基因组序列与其他CDV全基因组序列进行比较,同时以H基因构建系统发育树。结果显示,SY-12株全基因组序列的长度为15690nt,提至GenBank其登录号为KJ466106。与其他毒株进行同源性比较分析,CDV SY-12株基因组与其他毒株的相似性在92.3%~98.8%之间,与CDV PS分离株基因序列同源性最高,相似性高达98.8%,与Onderstepoort疫苗株的同源性最低,相似性为92.3%。基于CDV H基因及H蛋白序列分析结果与全基因分析的结果是一致的。系统发育树表明,所有CDV分离株分为疫苗株和野毒株两簇,CDV SY-12株和CDV PS及MKY-KM08位于同一支,属于亚洲1型。本研究表明基于CDV全基因序列或者CDV H基因序列亦或者是H蛋白氨基酸序列构建的系统发育树结果一致,都能反应出CDV的进化关系。
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