【背景与目的】干细胞移植在周围神经损伤修复中具有良好的运用前景。近年来有国内外文献报道,移植各类神经干细胞或前体细胞到损伤的周围神经中能改善PNI后的再生效果。但目前大部分的研究均是针对损伤后即刻修复情况,然而临床上的周围神经损伤病例大多不能在损伤后即刻修复,而是转化成了延期修复。在病理生理学上,周围神经损伤后慢性变性中,远端神经与肌肉出现了各种不利于神经再生的因素。这些不利因素主要包括远端神经内SCs的凋亡、各项与再生相关的生长因子水平下降以及远端肌肉慢性变性等。这些因素都严重影响了周围神经延期修复后轴突再生和靶器官功能恢复的效果。因此,如何改善延期修复中局部不利于神经再生的因素,是延期修复中的一个关键问题。目前在如何改善延期修复后局部不利于再生的微环境的方法上,主要有SCs细胞替代治疗,电刺激疗法,周围神经寄养等法。但这些方法都是通过施加一个早期干预来达到减缓延期修复时远端变性的程度,并不符合临床上的现状。因此,也有学者探索了在延期修复期移植SCs或者其前体细胞对延期修复后神经再生的促进作用,并得到了良好的结果。这些实验揭示了在PNI的延期修复中,移植SCs或者其他干细胞也能促进延期修复后神经的再生。但目前对于干细胞在PNI的延期修复中的运用,相关的研究仍较少。为此,我们假设移植胚胎脊髓细胞在周围神经损伤延期修复中具有促进神经再生的作用,并设计实验研究在PNI的延期修复中,远端神经内所移植胚胎脊髓细胞的生长状况以及移植的细胞对轴突再生和远端肌肉功能恢复的影响。【方法】本实验选取胫神经慢性变性模型模拟周围神经损伤后慢性变性,同时使用交叉吻合模型模拟延期修复手术。具体实验步骤如下。(1)取雄性SD大鼠30只制作左胫神经横断、慢性变性和左腓肠肌失神经支配的模型。(2)在慢性变性3个月后,将实验动物的左胫神经远端与新鲜切断的左腓神经近端进行“端-端吻合”,随后将实验动物随机分为实验组和对照组,分别在术中神经吻合成功后,在吻合口下远端2mm处注射培养液3ul(对照组)或胚胎脊髓悬液3ul(浓度为20000/ul)(实验组)。(3)术后动物饲养2月后,行电生理检测修复神经的功能,灌注取材后计算每只动物的双侧腓肠肌湿重,观察修复神经节段电镜检查及腓肠肌横截面染色和运动终板染色等。比较实验组及对照组的腓肠肌湿重、肌肉染色差异及修复神经节段中移植细胞的生存,分化情况、远端神经节段内有髓鞘轴突的生长状态,数目等的差异。【结果】实验组中修复节段内再生的有髓鞘轴突计数、神经横截面积、腓肠肌湿重、神经肌肉电生理检查和运动终板染色的统计结果均优于对照组,两组间的差异具有统计学意义。【结论】1.移植胚胎脊髓细胞至损伤的周围神经远端,移植细胞能存活、发育成神经元和运动神经元。2.在周围神经延期修复的过程中,局部移植胚胎脊髓细胞悬液由助于促进吻合后近端轴突的再生和远侧端肌肉的修复。