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目的:通过观察自发性高血压大鼠肾损害的程度,探讨补气活血药黄芪-丹参药对延缓大鼠肾损害的病理进程和肾脏保护药效,并通过研究药物对肾脏形态、肾脏AMPKα、Sestrin、Ca MKK的m RNA和蛋白质表达的影响,初步探讨黄芪-丹参药对对SHR肾损害保护作用的机制。方法:(1)实验组16周龄自发性高血压大鼠(Spontaneous Hypertension Rat,SHR)45只,同周龄WKY大鼠9只,常规饲养至6月龄后,根据随机数字表法将SHR平均分为5组,每组9只,分别为黄芪组(H组)、丹参组(D组)、黄芪-丹参组(HD组)、缬沙坦组(X组)、SHR模型组(M组),9只WKY大鼠作为对照组(W组)。(2)各组大鼠给予相应的药物,每日每只灌胃2ml,总计28天。(3)尾动脉加压法每周测量大鼠血压。(4)灌胃结束后,检测大鼠血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystain C)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平和尿中Cystain C、微量白蛋白(m ALB)、N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)等肾脏损伤标志物的水平,超声多普勒测定肾脏血流,观察大鼠肾脏大小、肾血流速度。(5)处死大鼠,取肾脏组织,行HE染色观察肾脏组织形态结构,透射电镜观察肾脏组织细胞病理变化;(6)实时荧光定量PCR检测肾脏AMPKα、Sestrin、Ca MKK的m RNA水平变化,Western Blotting法检测肾脏AMPKα、Sestrin、Ca MKK的蛋白质水平变化。结果:(1)灌胃4周后,各用药组较SHR模型组组相比,黄芪-丹参组、缬沙坦组大鼠血压显著下降,黄芪组、丹参组大鼠血压略有下降,但无统计学差异;与SHR模型组对比,大鼠尿NAG、m ALB明显降低(P<0.01),其中以黄芪-丹参组效果最明显;血清Cystain C、Cr、BUN、尿Cystain C检验结果对比均无统计学差异(P>0.05)。(2)肾脏血流左右两侧肾脏血流阻力指数(RI)对比,各用药组与SHR模型组相比明显降低(P<0.05),其中以黄芪-丹参组降低效果更明显。(3)HE染色可见,黄芪组、丹参组、黄芪-丹参组、缬沙坦组与SHR模型组相比,系膜区增生减轻,每系膜细胞数量减少,肾小管蛋白管型减少,其中以黄芪-丹参组改善效果最明显。(4)透射电镜可见,黄芪组、丹参组、黄芪-丹参组、缬沙坦组与SHR模型组相比,细胞形态较规则,足突融合程度较轻,细胞器较丰富,基底膜增厚程度较轻,细胞质较丰富,其中黄芪-丹参组可见线粒体明显肿胀,出现自噬小体。(5)实时荧光定量PCR检测显示,各组与SHR模型组相比,AMPK、Sestrin的m RNA表达明显上调(P<0.05),Ca MKKm RNA表达明显抑制(P<0.01),其中以黄芪-丹参组效果最明显;Western Blotting检测显示各用药组AMPKα、Sestrin、的蛋白表达均较SHR模型组明显上调,Ca MKK蛋白表达明显抑制,用药组中以黄芪-丹参组效果最明显。结论:(1)黄芪-丹参药对可显著改善SHR肾损害的程度,其药效优于黄芪、丹参的单独用药;(2)黄芪-丹参药对的药理机制与其上调SHR肾脏AMPKα、Sestrin表达、抑制Ca MKK表达,激活AMPK通路密切相关。