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第一部分调肝补肾消积疗法对晚期乳腺癌稳定期患者临床疗效的评价目的:探讨中医调肝补肾消积疗法对晚期乳腺癌稳定期患者疾病进展、中医症候、生活质量及免疫功能的影响。方法:采用前瞻性队列设计的研究方法,收集本院2014年9月~2017年9月一线化疗结束后,病情评估稳定的晚期乳腺癌患者100例,以是否接受中医调肝补肾消积疗法的治疗分为对照组和观察组,对照组采用西医常规治疗,观察组在西医常规治疗的基础上配合服用中医调肝补肾消积疗法的中药。分析比较两组患者治疗后无进展生存期(PFS)、中医症候积分、卡氏评分(Kanofsky score,KPS)、汉密尔顿抑郁量表评分(HAMD)、以及外周血细胞免疫和体液免疫水平。结果:共收集有效病例95例,对照组47例,观察组48例。(1)两组患者PFS比较,对照组M-PFS为5.90个月,观察组为8.00个月,观察组较对照组延长2.1个月(P<0.05);两组ER(-)/PR(-)型患者PFS比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组ER(+)/PR(+)型患者PFS比较,对照组M-PFS为6.00个月,观察组为10.40个月,观察组较对照组延长4.4个月(P<0.05);两组Her-2(-)型患者PFS比较,对照组M-PFS为6.20个月,观察组为10.60个月,观察组较对照组延长4.4个月(P<0.01);两组Her-2(+)型患者PFS比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)两组患者中医症候积分比较,治疗后观察组中医情志抑郁、不寐、心烦易怒、自汗盗汗、五心烦热、腰膝酸软、口干舌燥症候积分以及中医症候总积分较治疗前明显下降,且明显低于对照组治疗后(P<0.05,P<0.01)。(3)两组患者KPS评分比较,观察组好转率为45.8%,对照组好转率为21.3%,观察组明显高于对照组(P<0.01);观察组恶化率为6.3%,对照组恶化率为19.1%,观察组明显低于对照组(P<0.01)。(4)两组患者HAMD评分比较,观察组有效率为77.1%,对照组有效率为57.4%,观察组明显高于对照组(P<0.05)。(5)两组患者细胞免疫和体液免疫比较,治疗后观察组CD3+水平、CD4+水平、CD4+/CD8+比值、NK细胞水平以及免疫球蛋白Ig G、Ig M、Ig A较治疗前明显升高,且明显高于对照组治疗后(P<0.05,P<0.01)。结论:中医调肝补肾消积疗法能有效地延缓晚期乳腺癌稳定期患者的疾病进展,改善患者的中医症候,提高患者的生活质量和免疫功能。第二部分莪术二酮对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制目的:探讨莪术二酮对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞迁移和侵袭的影响及可能的作用机制方法:CCK-8法检测莪术二酮对MDA-MB-231、MCF-7细胞生长活力的影响,并确定后续实验的药物作用浓度;细胞黏附实验检测莪术二酮对MDA-MB-231、MCF-7细胞黏附能力的影响;划痕迁移实验检测莪术二酮对MDA-MB-231、MCF-7细胞划痕迁移能力的影响;Transwell检测莪术二酮对MDA-MB-231、MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测莪术二酮对MDA-MB-231、MCF-7细胞中MAPK和Akt信号通路上的关键蛋白ERK、p38、Akt以及磷酸化水平的影响;Western blot和Real-time PCR检测莪术二酮对MDA-MB-231、MCF-7细胞中MMP-2、MMP-9蛋白及m RNA水平表达的影响。结果:(1)CCK-8结果显示:当莪术二酮浓度≤50μmol/L时,对MDA-MB-231、MCF-7细胞生长活力无明显影响,当浓度≥100μmol/L时,对MDA-MB-231、MCF-7细胞生长活力有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01),且呈时间和浓度依赖性。选取对细胞生长活力无明显影响的莪术二酮浓度(12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)进行后续实验。(2)细胞黏附实验结果显示:MDA-MB-231、MCF-7细胞经12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度莪术二酮干预24h后,细胞黏附率明显低于空白对照组(P<0.01),且在一定范围内呈浓度依赖性。(3)划痕迁移实验结果显示:MDA-MB-231、MCF-7细胞经12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度莪术二酮持续干预24h和48h后,细胞划痕迁移率明显低于空白对照组(P<0.05,P<0.01),且在一定范围内呈浓度依赖性。(4)Transwell结果显示:MDA-MB-231、MCF-7细胞经12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度莪术二酮干预24h后,迁移和侵袭细胞数明显少于空白对照组(P<0.05,P<0.01),且在一定范围内呈浓度依赖性。(5)Western blot结果显示:与空白对照组比较,12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度的莪术二酮能明显抑制MDA-MB-231、MCF-7细胞ERK、p38、Akt的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),且在一定范围内呈浓度依赖性。(6)Western blot和Real-time PCR的结果显示:与空白对照组比较,12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度的莪术二酮能显著降低MDA-MB-231、MCF-7细胞MMP-2、MMP-9蛋白和m RNA的表达量(P<0.01),且在一定范围内呈浓度依赖性。结论:莪术二酮能明显降低人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的迁移和侵袭能力,作用机制可能与抑制MAPK和Akt信号通路上的关键蛋白ERK、p38以及Akt的磷酸化水平,进而下调MMP-2和MMP-9的表达有关。