【摘 要】
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斑翅果蝇（Drosophila suzukii Matsumura）是一种原产于东南亚的农业害虫,具有强大的繁殖力和生存能力。在过去的几十年里,这种害虫已经扩大了侵染范围,影响到世界各地主要的水果产区,造成巨大经济损失。由于现阶段防控措施严重依赖杀虫剂,已超过农药最大残留限量且影响作物产出,所以必须采用害虫综合管理策略以减少化学药品的投入。新兴的基因防控可以有效抑制野生种群发展,而且毛锤角细蜂（T
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斑翅果蝇（Drosophila suzukii Matsumura）是一种原产于东南亚的农业害虫,具有强大的繁殖力和生存能力。在过去的几十年里,这种害虫已经扩大了侵染范围,影响到世界各地主要的水果产区,造成巨大经济损失。由于现阶段防控措施严重依赖杀虫剂,已超过农药最大残留限量且影响作物产出,所以必须采用害虫综合管理策略以减少化学药品的投入。新兴的基因防控可以有效抑制野生种群发展,而且毛锤角细蜂（Trichopria drosophilae;Hymenoptera:Diapriidae）是对斑翅果蝇寄生效率最好的天敌。本研究针对斑翅果蝇的现阶段防控问题,通过探究胰岛素信号调控斑翅果蝇生殖滞育及高温对毛锤角细蜂的影响,从基因防控及生物防控两方面入手,共同探究对它的防控措施。首先,制备试验所需的蛋白抗体。将斑翅果蝇的卵黄蛋白（Yolk Protein 1,YP1）、叉头转录因子（Forkhead box O,Fox O）基因分别构建重组表达载体,诱导表达并免疫小鼠制备抗体,用成功制备的抗体进行斑翅果蝇蛋白Western Blot验证。结果显示构建的表达载体在大肠杆菌中表达了融合蛋白,制备的多克隆抗体具有较好的特异性,且在稀释18000倍后条带依旧清晰,表明成功制备了斑翅果蝇的Anti-Ds-YP1、Anti-Ds-Fox O多克隆抗体,可用于后续试验。其次,通过以下试验探究与斑翅果蝇生殖滞育相关的调控因素。发现与非滞育组相比,斑翅果蝇滞育组的卵巢发育小且YP1蛋白的表达量低,胰岛素含量低,甘油三酯（Triacylglycerol,TG）含量高且脂滴明显大,胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路（Insulin/insulin-like growth factor signaling pathway,ⅡS）基因胰岛素受体（Insulin receptor,In R）、蛋白激酶B（Akt/Protein Kinase B,PKB）、Ds Fox O的转录水平及其磷酸化蛋白表达量低,说明斑翅果蝇的生殖滞育调控可能与胰岛素信号有关。为确定胰岛素信号是否参与调控其生殖滞育,取羽化2 h内的雌虫显微注射牛胰岛素及胰岛素受体抑制剂,注射PBS作为对照组,分别培育在滞育及非滞育条件下,观察其对斑翅果蝇的影响。与对照相比,注射胰岛素后的第10、15天时,其卵巢发育得更大,YP1蛋白表达量也更高,胰岛素含量高,TG含量低,ⅡS关键基因Ds In R、Ds Akt、Ds Fox O的转录水平及其磷酸化蛋白表达量高;同步对注射胰岛素受体抑制剂样品进行卵巢发育变化、YP1蛋白、TG含量检测和各基因转录水平及磷酸化蛋白水平检测,在第10、15天时的结果均与胰岛素注射结果相反,说明胰岛素信号能够通过ⅡS调控斑翅果蝇的生殖滞育。最后,通过探究高温对斑翅果蝇天敌—毛锤角细蜂的影响,为寄生蜂的田间释放提供实践依据。通过对羽化率、寄生率、发育历期、死蛹解剖四方面的探究,发现毛锤角细蜂的预蛹后期更能耐受高温胁迫。预蛹后期在30℃条件下能够存活并成功羽化,在35℃可以发育但不能羽化,在40℃无法发育;但幼虫期在30℃时,若胁迫时间只有24h还可正常羽化,若超过此时间其羽化率会变的很低,在35℃、40℃下均无法发育。它们的发育历期均在20天左右。因此在田间释放寄生蛹时,建议运输及释放过程中温度不超过30℃,且释放的寄生蛹发育时期越晚其对高温的耐受性越好。根据运输时间进行调整,若在5天内,可运输的最高温度为30℃,商品为发育历期14天的寄生蛹;若在5-20天,可运输的温度最好不超过25℃,商品可为试验中任意发育历期的寄生蛹。
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