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目的观察红花（HH）对博来霉素诱导的系统性硬化症（SSc）小鼠皮肤组织纤维化的影响,并基于UHPLC-Q-TOF/MS的代谢组学技术对SSc小鼠的皮肤进行代谢组学分析,探讨红花抗SSc小鼠皮肤纤维化的作用机制。方法按随机数字表法将40只SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为空白对照组（Control group）、系统性硬化症模型组（SSc group）、醋酸泼尼松组（SSc+Pred group）、红花水提液组（SSc+HH group）,每组10只,通过博来霉素诱导建立系统性硬化症小鼠模型。除Control组小鼠予背部皮下注射浓度为0.01mol/l的PBS溶液（p H=7.2）外,其余各组小鼠均予背部皮下注射浓度为500μg/ml的BLM溶液。各组小鼠皮下注射量及频次为0.1ml/d,每日1次,共28d。造模同时,Control组和SSc组给予0.2ml/d生理盐水灌胃,SSc+HH组给予红花水提液0.2ml/d灌胃,SSc+Pred组予醋酸泼尼松溶液0.2ml/d灌胃。观察各组小鼠的一般状态（精神状态、饮食、活动度、灵敏性、背毛光泽度及生长速度、皮肤硬度等）以及体重变化。造模及灌胃连续28天后处死各组小鼠,采集小鼠皮肤组织,采用HE染色、Masson染色观察各组小鼠皮肤组织病理改变、组织胶原纤维含量变化,并测量真皮厚度;利用超高效液相色谱四级杆串联飞行时间质谱（UHPLC-Q-TOF/MS）的代谢组学技术检测各组小鼠皮肤组织代谢物的变化,并通过主成分分析法（PCA）、正交偏最小二乘判别分析法（OPLS-DA）等多元统计学分析筛选出各组小鼠皮肤组织中内源性生物标志物,进而得到所涉及的相关代谢通路,发现差异性代谢物及红花对差异代谢物的调节作用,进一步探讨红花抗SSc小鼠皮肤纤维化的作用机制。结果1.一般情况Control组小鼠精神状态佳,警惕性强;进食量如常;性格活泼,在笼内四处翻爬;背毛整洁毛发光亮、生长迅速;皮肤柔软,可轻松提起;SSc组小鼠精神状态差,饮食日益减少,喜静恶动,蜷缩于角落,反应较迟钝,背部造模区皮肤几乎未见毛发新生,皮肤变硬增厚。SSc+Pred组小鼠神态饮食情况较SSc组小鼠好转,活动度较好,背毛逐渐增长、光泽度趋向正常,皮肤较柔软。SSc+HH组小鼠精神状态、饮食趋近正常,活动度好,背部毛发生长情况、皮肤柔软度均接近正常。2.体重变化Control组小鼠体重逐渐增加;与Control组比较,SSc组小鼠体重显著下降（p＜0.01）;SSc+Pred组和SSc+HH组小鼠体重均较SSc组明显增加（p＜0.01）,但SSc+HH组小鼠体重增加幅度更接近正常。3.皮肤组织HE染色及真皮厚度变化Control组小鼠皮肤组织形态结构正常,皮肤附属器完整,真皮下可见毛囊,腺体,无明显炎症细胞浸润;与Control组相比,SSc组小鼠皮肤表皮棘层、真皮层均明显增厚,胶原纤维排列紊乱且显著增多,毛囊减少,腺体、脂肪层、肌肉层萎缩,周围可见炎症细胞浸润;与SSc组相比,SSc+HH组与SSc+Pred组均可见真皮层变薄,炎症细胞浸润情况改善,皮下附属器增多等,胶原纤维相对减少,其中SSc+HH组改善较SSc+Pred组明显。4.皮肤组织Masson染色及胶原纤维含量变化Control组小鼠皮肤组织中胶原纤维含量未见明显改变;与Control组比较,SSc组小鼠皮肤组织中成纤维细胞数量明显增多,胶原纤维含量明显增加（p＜0.01）,SSc+Pred组小鼠和SSc+HH组小鼠皮肤组织中胶原纤维含量较SSc组明显下降（p＜0.01）,SSc+HH组优于SSc+Pred组。5.皮肤组织代谢生物标志物筛选及红花干预影响在正、负离子模式下共筛选得到23个具有显著差异的内源性生物标志,分别为腺苷（Adenosine）、N-油酰基乙醇胺（N-Oleoylethanolamine）、D-哌柯林酸（D-Pipecolinic acid）、L-天冬酰胺（L-Asparagine）、L-蛋氨酸（L-Methionine）、L-亮氨酸（L-Leucine）、柠檬酸（Citraconic acid）、甘油酸（Glyceric acid）、亚麻酸（Linolenic acid）、环己基氨基磺酸盐（Cyclohexylsulfamate）、二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid）、3-磷酸甘油（Glycerol 3-phosphate）、泛酸（Pantothenate）、苏氨酸（L-Threonine）、十二酸（Dodecanoic acid）、苯丙酮酸（Phenylpyruvate）、谷氨酸（L-Glutamate）、DL-3-苯基乳酸（DL-3-Phenyllactic acid）、L-色氨酸（L-Tryptophan）、丙氨酸（L-Alanine）、L-苯丙氨酸（L-Phenylalanine）、缬氨酸（L-Valine）、D-天门冬氨酸（D-Aspartic acid）。与Control组相比SSc组N-油酰基乙醇胺、D-哌柯林酸、L-天冬酰胺、L-蛋氨酸、L-蛋氨酸、泛酸、苏氨酸、苯丙酮酸、谷氨酸、DL-3-苯基乳酸、L-色氨酸、丙氨酸、L-苯丙氨酸、缬氨酸、D-天门冬氨酸这些物质表达含量上调（p＜0.05）,腺苷、柠檬酸、环己基氨基磺酸盐表达含量下调（p＜0.05）。经红花干预后,以上差异代谢物质表达含量趋向正常。6.相关代谢通路分析筛选得到的内源性生物标志物涉及到20条相关代谢通路,其中9条与红花抗皮肤纤维化最为密切,分别为蛋白质消化吸收（Protein digestion and absorption）、ABC转运蛋白（ABC transporters）、氨酰-t RNA生物合成（Aminoacyl-t RNA biosynthesis）、氨基酸的生物合成（Biosynthesis of amino acids）、癌症中的中央碳代谢（Central carbon metabolism in cancer）、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢（Glycine,serine and threonine metabolism）、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢（Alanine,aspartate and glutamate metabolism）、不饱和脂肪酸的生物合成（Biosynthesis of unsaturated fatty acids）、2-氧代羧酸代谢（2-Oxocarboxylic acid metabolism）。结论1.红花可改善博来霉素诱导的SSc小鼠皮肤真皮厚度和纤维化程度,具有抗SSc小鼠皮肤纤维化作用。2.SSc小鼠皮肤代谢轮廓发生了显著的变化,明显扰动了氨基酸的生物合成与代谢、能量代谢和脂质代谢、ABC转运蛋白、氨酰-t RNA生物合成、癌症中的中央碳代谢。3.HH对SSc小鼠皮肤组织中异常变化的代谢物水平和相关代谢通路有不同程度的调控作用,其可能通过调节氨基酸代谢、能量代谢和脂质代谢、ABC转运蛋白、氨酰-t RNA生物合成、癌症中的中央碳代谢、2-氧代羧酸代谢而起到抗SSc皮肤纤维化作用。