论文部分内容阅读
研究目的利用前瞻性队列随访数据评估高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hrHPV)基因型别和病毒DNA甲基化在预测子宫颈癌发病风险中的作用,为其应用于HPV阳性人群的分流管理和癌前病变的随访监测提供有力的科学证据。材料与方法基于在我国子宫颈癌高发区山西省襄垣县建立的子宫颈癌筛查队列(SPOCCSⅠ)中2005-2014年随访数据,以年龄为41-51岁、具有完整子宫颈的1,742名女性作为研究对象,采用PCR为基础的线性探针反向杂交技术(SPF10-LiPA)对HC2检测结果阳性的既往细胞学标本进行HPV基因型别检测;采用亚硫酸氢盐-焦磷酸测序法对HPV16阳性标本进行病毒DNA L1区和长控制区(LCR)甲基化水平的定量检测;以病理活检结果为金标准,判定随访过程中的疾病结局和疾病转归(逆转、持续和进展)情况。利用Kaplan-Meier方法估算不同型别hrHPV阳性者10年内形成高度癌前病变及子宫颈癌的累积发病风险,并采用Cox比例风险模型计算相应的风险比,评估基因型别对HPV阳性人群风险分层的作用;利用Mann-WhitneyU检验分析HPV16 L1和LCR区DNA甲基化水平与疾病转归的关联,评估病毒甲基化在预测疾病进展中的作用。研究结果1.hrHPV基因型别预测子宫颈癌的累积发病风险:(1)型别分布:队列人群中最常见为HPV16和52型别,其他常见型别按降序排列依次为58、33、18、51、31和56,HPV16感染率在随访过程中有下降趋势;(2)一次感染发病风险:一次感染HPV16女性形成中度及以上宫颈上皮内瘤样病变(CIN2+)的风险最高,10年内累积发病率为 47.8%(95%CI = 36.0%-58.7%),HPV31 与 HPV16 接近(46.3%,95%CI:19.6%-69.5%),其他发病风险较高的有HPV 58、39、33、18和52,风险最低的有HPV45,51,56,59和68;(3)多次感染发病风险:HPV16、31、33和58感染后形成CIN2+的累积发病风险与感染次数有关,随着感染次数增加,累积发病风险增加(p<0.001),其他高危型HPV并未发现相似规律;(4)筛查效力:HPV检测中增加基因型别可提高CIN2+的累积检出率,筛查效力最高的型别为HPV16、31和58,一次检测可避免60.8%CIN2+发生;(5)型别特异性HPV伴不同病毒载量者持续感染的风险:HPV16病毒载量与持续感染具有剂量效应关系,高病毒载量组和中病毒载量组发生持续性感染的风险分别约为低病毒载量组的23倍和4倍;(6)不同病毒载量的特定型别HPV感染者的发病风险:hrHPV感染者发生CIN2+的累积发病风险与病毒载量存在一定的剂量效应关系,HP16/18高病毒载量组和中病毒载量组发生CIN2+的风险分别约为低病毒载量组的3倍和2倍,非16/18hrHPV感染者高病毒载量时发病风险与细胞学异常者相近。2.HPV16L1和LCR区甲基化预测宫颈病变转归:(1)横断面筛选CpG位点:L1 区 12 个CpG 位点(5602、5608、5611、5617、5709、5726、5927、6367、6389、6457、6650、7034)和 LCR 区 2 个 CpG 位点(7535 和 7553)甲基化水平与病变相关(所有p<0.05);(2)不同CpG位点甲基化与疾病转归关系:L1区位点6650高甲基化对不同病变人群的疾病进展具有预测作用;LCR区尚未发现稳定位点可预测感染结局;(3)不同CpG位点间相关性:L1和LCR区基因片段中大多数核酸位置相近的CpG位点甲基化水平具有较强的相关性;(4)DNA甲基化与病毒载量相关性:无论病变程度,L1和LCR区大部分CpG位点的甲基化水平与病毒载量相关性不强。研究结论1.hrHPV基因型别引起子宫颈癌及癌前病变的累积发病风险不同,按顺序依次为:HPV16、31、58、39、33、52、18、45、51、56、59、68,因此基因分型检测分流HPV阳性人群是可行的,但如何转诊和随访尚需要结合不同国家对风险阈值的接受程度和经济承受能力而定。2.特定型别HPV多次感染后子宫颈癌和癌前病变的风险明显增加,提示子宫颈癌定期筛检和监测是必要的,如若发现持续阳性者应给予密切随访或转诊治疗。3.HPV基因分型检测应用于子宫颈癌筛查时,累积检出子宫颈癌及癌前病变的效力随HPV检测型别的增加而增高,其中HPV16,31和58贡献最大,这为“HPV基因分型技术为主导”的子宫颈癌筛查策略的制定提供技术参考。4.子宫颈癌及癌前病变的发病风险随特定型别HPV感染者病毒载量的升高而升高。对于非16/18型别阳性者,在细胞学等分流措施不具备条件下,病毒载量可作为HPV阳性人群进一步分流的参考依据。5.HPV16 DNA L1和LCR区不同CpG位点甲基化与疾病关联模式不同,L1区部分CpG位点有助于识别疾病进展的人群,可能作为HPV感染的分流标志物,但仍需要大样本人群的前瞻性验证。