目的通过对比细菌革兰双检荧光定量PCR、细菌培养在新生儿败血症诊断价值上的差异,以期获得敏感、快速、准确的病原学检测方法。方法以临床常见菌16S rRNA基因为靶序列,在高度保守区设计通用引物、革兰阳性和阴性分型探针,建立细菌革兰阴、阳性菌双通道荧光定量PCR检测体系。收集福建省妇幼保健院新生儿科2016年2月到2017年1月疑似细菌感染的新生儿的无菌体液标本(血液、脑脊液、腹水)2份,其中一份行细菌培养检测,另一份统一经过DNA提取,行细菌双荧光定量PCR检测,检测结果进行统计学分析。结果1.在304例临床标本中,血液标本254例,脑脊液标本45例,腹水标本5例。细菌革兰双检荧光定量PCR共检出59例阳性标本,阳性率为19.41%(59/304);细菌培养共检出44例,阳性率为14.47%(44/304),细菌双荧光定量PCR阳性率高于细菌培养阳性率,差异有统计学意义P<0.05。2.细菌革兰双检荧光定量PCR检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为81.8%、91.2%、61.0%、96.7%。3.细菌革兰双检荧光定量PCR在鉴别革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌感染中,敏感度差异明显(73.9%VS 90.5%),但特异度、阳性预测值、阴性预测值差异不大。结论细菌革兰双检荧光定量PCR在早期识别细菌感染、鉴别细菌革兰氏分型及排除细菌感染都有重要的临床应用价值。