基于水油体系与MagPack的自动核酸提取/扩增方法和仪器研究

来源 :北京理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenmin673594913
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当前,用于指定基因型鉴定的核酸片段提取,扩增技术已经发展为刑侦,防疫,临床医疗等行业的重要手段之一。经典的核酸片段提取以及扩增方法是相互独立的。在一般情况下,核酸的提取多采用高速离心和固相提取等方式,同时结合独立的PCR扩增以实现对原核酸片段的大量重现。然而,经典的核酸提取-扩增方法涉及的相关设备体积巨大,所需时间较长,而且操作复杂,样品在操作中容易受到污染进而影响检测结果可靠性,上述问题的产生均不利于相关检测体系实时化,现场化,小型化的发展。本研究构建了一种利用水相-油相体系表面张力的选择性穿越结构,同时,针对多个含有水油体系的腔体进行了微流控芯片设计。这种微流控芯片,配合基于水油体系的磁珠转移模型(在论文中称其为Mag Pack)实现了对核酸提取的目的。进一步的,本论文将LAMP等温核酸扩增模块集成于芯片,并且基于芯片,研发了一套完整的自动化检测-扩增仪器。研究基于该仪器,成功实现了针对人体HP基因型的定性分型。本研究自主提出了一套核酸提取的自动化理论方案,结合等温扩增技术,设计了一体化芯片,研发了小型化仪器。针对小型化仪器的实验结果表明:当采用25u L纯血样品,该装置能够成功对样品的核酸进行扩增,并显示出较为提供者的HP基因进行分型。研究成功实现了一套基于理论创新的工程仪器,能够避免当前核酸提取及扩增中操作繁琐,耗时长,需要借助大型设备,有毒性等问题。研究不仅具有科学意义,同时具有工程化及产品化方向上的潜能,为未来病原体,癌症等临床应用诊断奠定基础,为实现的小型化,一体化,样品进-结果出型自动化设备的未来发展作出贡献。
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