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目 的放射性肠道损伤是盆腹腔肿瘤放疗的主要毒副反应,也是放疗常见的急性并发症之一,目前临床上尚无特效的防治药物。本课题通过研究鸦胆子苦醇对小鼠肠道辐射损伤的防护作用,旨在为急性放射性肠道损伤提供新的防治手段。方 法将小鼠分为 Control组、IR 组及 0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg BRU 给药组,每组6只,在照射前1 d和3h分别给予腹腔注射鸦胆子苦醇或安慰剂,并在12 Gy 60Co γ射线全身照射后3.5 d制备病理切片,免疫组化观察空肠BrdU+隐窝数,以确定最佳给药剂量。将小鼠分为Control组、IR组及BRU组,每组6只,在照射前1 d和3 h分别给予腹腔注射1.0 mg/kg鸦胆子苦醇或安慰剂,并在12 Gy 60Co γ射线全身照射后制备空肠组织切片,通过H＆E染色观察照后3.5 d空肠绒毛长度和隐窝深度,Tunel法检测照后6 h和24 h的空肠隐窝细胞凋亡,免疫组织化学染色观察照后3.5 d的Olfm4+肠干细胞数量、Lysozyme+Paneth细胞数量,以明确鸦胆子苦醇对肠道组织细胞结构的辐射防护效果。另一方面,观察全身（60Co γ射线）或腹部（X射线）分级照射15～16 Gy后对小鼠存活率和体重变化的影响,以明确鸦胆子苦醇对急性放射性肠道损伤的辐射防护及远期恢复效果。另外,通过研究鸦胆子苦醇预防给药对Nrf2或NF-κB1基因敲除小鼠60Co γ射线照射后3.5 d肠道BrdU+增殖隐窝数的影响来初步探讨鸦胆子苦醇潜在的辐射防护机制。结 果小鼠在照射前1 d及3 h给予不同浓度的鸦胆子苦醇或安慰剂后,对小鼠进行12 Gy 60Co γ射线辐射,照射后3.5 d的空肠免疫组化结果显示:各组BrdU+增殖隐窝数分别为Control组102.4±7.9个、IR组35.1±6.6个、0.5 mg/kg组50.0±5.0 个、1.0 mg/kg 组 58.0±6.0 个、1.5 mg/kg 组 53.8±4.2 个。与照射对照组相比,鸦胆子苦醇预防给药可以剂量依赖性显著增加照射后小鼠空肠的BrdU+增殖隐窝数（n=3,P＜0.0001）,其中以1.0 mg/kg剂量组的防护作用最好,所以此后的体内实验均以1.0 mg/kg给药。在15～16 Gy分级照射X线（WAI,n=8）及60Co γ射线（TBI,n=10）的存活实验中,1.0 mg/kg鸦胆子苦醇预防给药可以明显提高致死剂量照射后小鼠的存活率,延长存活时间,促进体重恢复（P＜0.01）。12 Gy 60Co γ射线照射后3.5 d,H＆E染色及Image J软件测量结果显示Control组、IR组与BRU组的空肠绒毛高度分别为452.4±47.6 μm、237.5±44.8μm、275.1±46.4 μm,空肠隐窝深度分别为 78.4±12.9 μm、64.2±12.7 μm、76.1±22.1 μm;统计分析表明与IR组相比,1.0 mg/kg鸦胆子苦醇预防给药可以显著增加照射后空肠绒毛长度（n=6,P＜0.0001）及隐窝深度（n=6,P＜0.001）,有效减轻了照射后空肠组织结构的损伤。照射后3.5 d的免疫组化及计数结果显示Control组、IR组及BRU组的Olfm4+干细胞数量分别为5.0±1.3个、2.7±1.2个、3.8±1.5个,Lysozyme+Paneth 细胞数量分别为 4.3±1.4个、2.7±1.2个、3.4±1.5个,相比于照射对照组,1.0 mg/kg鸦胆子苦醇预防给药可以显著增加空肠隐窝中Olfm4+肠干细胞（n=6,P＜0.001）以及Lysozyme+Paneth细胞数目（n=6,P＜0.01）,这有利于照射后肠道组织的恢复。Tunel法检测空肠隐窝细胞凋亡的结果显示,Control组几乎观察不到凋亡细胞,而12 Gy 60Co γ射线照射后6 h、24 h凋亡细胞数显著增加,其中IR组与BRU组照后6h隐窝细胞凋亡计数分别为4.9±2.9个和3.4±2.2个,照后24 h计数分别为2.3±1.2个和1.7±1.1个,统计结果表明1.0mg/kg鸦胆子苦醇可以显著减少照射后6 h（n=6,P＜0.0001）及24h（n=6,P＜0.01）的空肠隐窝细胞凋亡。在鸦胆子苦醇对Nrf2基因敲除小鼠照射后BrdU+增殖隐窝数影响的研究中,免疫组化结果显示,12 Gy60Co γ射线照射后3.5 d,各组BrdU+增殖隐窝数分别为:WTIR 组 45.3±6.0 个、KOIR 组 47.5±5.6 个、WTBRU 组 69.5±6.9 个、KO BRU组67.6±10.0个;在14 Gy 60Co γ射线照射后3.5 d,各组BrdU+增殖隐窝数分别为:WTIR组9.6±3.8个、KOIR组8.7±4.1 个、WTBRU 组27.2±4.3个、KO BRU组24.9±4.3个。无论是WT小鼠还是KO小鼠,鸦胆子苦醇预防给药均可以显著增加照射后空肠增殖隐窝数,但在WT IR组与KO IR组之间以及WT BRU组与KO BRU组之间并未观察到有明显的差异（n=3,P＞0.05）。同样的趋势在NF-κB1基因敲除小鼠中也被观察到,12 Gy60Co γ射线照射后的3.5 d,各组BrdU+增殖隐窝数分别为:WT IR组53.5±9.5个、KO IR组45.4±8.6个、WT BRU组88.0±7.5个、KO BRU组95.6±6.6个,鸦胆子苦醇预防给药显著增加了照后空肠增殖隐窝数,但并未在WT IR组与KO IR组之间以及WT BRU组与KO BRU组之间观察到存在显著统计学差异（n=3,P＞0.05）。结 论鸦胆子苦醇能够明显改善照射后小肠组织结构损伤,对小鼠急性放射性肠道损伤具有良好的防护作用。鸦胆子苦醇显著提高肠隐窝细胞再生能力和小肠干细胞数量,抑制肠隐窝细胞凋亡,但其作用机制可能与Nrf2及NF-κB1信号分子无关。