目的:了解我国丝状真菌临床流行病学特点,探索分子测序技术及MALDI-TOF质谱鉴定技术在临床丝状真菌鉴定诊断上的应用效能。方法:本研究纳入中国医院感染侵袭性真菌监测项目（CHIF-NET）北方地区8省35家医院2018-2019年度的566株临床丝状真菌。对566株丝状真菌进行常规法和硅珠法两种蛋白提取方法在Vitek MS质谱鉴定丝状真菌上的应用评估。遴选178株代表性丝状真菌进行ITS、BenA、CaM序列在丝状真菌分子鉴定上的性能评估,对本研究发现典型菌株进行形态学观察,对菌株来源单位原始鉴定结果进行有效性评价,对多种丝状真菌的鉴定方法进行综合分析。基于质谱鉴定和分子鉴定的综合结果进行临床流行病学分析讨论。结果:使用566株丝状真菌进行常规法和硅珠法两种蛋白提取方法在Vitek MS质谱鉴定丝状真菌上的应用评估,仅有15株（2.7%）使用两种蛋白提取方法均无鉴定结果,551株（97.3%）由一种或两种蛋白提取方法经过交叉整合得出综合鉴定结果,可鉴定到种或复合群,其中常规法可鉴定出526株（95.5%）,硅珠法可鉴定出512株（92.9）,两种方法一致鉴定出487株（88.4%）。共计分离到517株（93.8%）曲霉属、18株（3.3%）镰刀菌属和其他丝状真菌16株（2.9%）。在曲霉属中两种方法的鉴定率均高于93.8%,一致性为89.9%。在镰刀菌属和其他丝状真菌中两种方法的一致性分别为61.1%和68.8%,各有所长。常规法对镰刀菌属的平均鉴定率为94.4%,优于硅珠法;硅珠法对其他丝状真菌的平均鉴定率为93.8%,优于常规法。针对178株丝状真菌,Vitek MS质谱鉴定效能为:43株（24.2%）鉴定到种,1 17株（65.7%）鉴定到复合群,3株（1.7%）鉴定错误,15株（8.4%）无鉴定结果。曲霉属:141株曲霉属的鉴定效能为:29株（20.6%）鉴定到种,109株（77.3%）鉴定到复合群,3株（2.1%）无鉴定结果,0株鉴定错误。镰刀菌属:17株镰刀菌属的鉴定效能为:7株（41.2%）鉴定到种,8株（47.1%）鉴定到复合群,2株（11.8%）无鉴定结果,0株鉴定错误。对于20株其他真菌的鉴定效能为:7株（35.0%）鉴定到种,7株（35.0%）无鉴定结果,3株（15%）鉴定错误。针对178株丝状真菌,ITS可以将丝状真菌鉴定属或复合群,BenA可将曲霉菌属、青霉菌属和篮状菌属鉴定到复合群或种,CaM可将曲霉菌属、青霉菌属和篮状菌属鉴定到种。曲霉属:ITS可以将全部菌株鉴定到组,甚至可以将烟曲霉鉴定到种。BenA可以将11种曲霉中的5种直接鉴定到种,包括烟曲霉、土曲霉、黑色组中塔宾曲霉和琉球曲霉以及黄色组中的红绶曲霉。除黄/米曲霉外,CaM可以将11种曲霉中的其余10种直接鉴定到种。镰刀菌属:对于镰刀菌属,ITS序列比对结合系统进化树分析,可以将角膜镰刀菌、镰状镰刀菌和厚孢镰刀菌鉴定到种,对于轮枝镰刀菌、层生镰刀菌、茄病镰刀菌3种镰刀菌鉴定到复合群。其他真菌:关于青霉属,ITS可以将全部菌株鉴定到属,甚至可以将乔治亚青霉鉴定到种。BenA无法将产黄青霉与其近缘菌区分,将草酸青霉和乔治亚青霉鉴定到种。CaM可以将3种青霉直接鉴定到种。对于马尔尼菲篮状菌和绳状篮状菌,ITS可以鉴定到属,BenA和CaM可以鉴定到种。另外,ITS可将根霉属、赛多孢属、链格孢属的4种菌鉴定到种,而木霉属仅能鉴定到属。针对178株丝状真菌中,菌株来源单位原始鉴定结果为:49株（27.5%）鉴定到种,72株（40.4%）鉴定到复合群,30株（16.9%）鉴定到属,27株（15.2%）鉴定错误。曲霉属:141株曲霉属的鉴定效能为:44株（31.2%）鉴定到种,72株（51.1%）鉴定到组,116株（82.3%）可鉴定到种或组,其中可鉴定到种的曲霉中黑曲霉（91.7%）和烟曲霉（87%）占比较高。10株（7.1%）鉴定到属,15株（10.6%）鉴定错误。镰刀菌属:17株镰刀菌属的鉴定效能为:1株层生镰刀菌（5.9%）鉴定到种,14株（82.4%）鉴定到属,2株（11.8%）鉴定错误。其他真菌:对于20株其他真菌的鉴定效能为:4株（20.0%）鉴定到种,6株（30.0%）鉴定到属,10株（50%）鉴定错误。在2018年1月至2019年12月,我国北方8个省份的35家医院共收集丝状真菌菌株600余株。最终复核鉴定剔除信息不全和非丝状真菌后纳入本研究的菌株共计566株,共涉及10个属24个种或复合群。在10个菌属中,以曲霉属为主,520株占比91.9%;非曲霉属46株（8.1%）共涉及9个属,分别为镰刀菌属20株（3.5%）、青霉属5株（0.9%）、赛多孢属5株（0.9%）、木霉属5株（0.9%）、篮状菌4株（0.7%）及其他真菌7株（1.2%）。在24个菌种中,总分离率前五名均为曲霉菌,由高到低分别为:烟曲霉268株（47.3%）、黑曲霉复合群112株（19.8%）、黄曲霉78株（13.8%）、土曲霉复合群36株（6.2%）、构巢曲霉23株（4.1%）等。从5种曲霉菌来源患者基础疾病分析,排名前三的疾病种类分别为呼吸系统疾病占62.6%（323/516）、耳道疾病占15.3%（79/516）以及心血管疾病占4.1%（21/516）。下呼吸道是分离曲霉菌最常见的部位,下呼吸道痰占所有样本的75.4%（389/516）,其次为耳拭子占15.5%（80/516）、肺泡灌洗液占5.2%（27/516）以及其他类型样本占3.9%（20/516）。曲霉感染患者的年龄范围是4-94岁,平均值为61.4岁,中位数为64岁。烟曲霉、黄曲霉、土曲霉和构巢曲霉,在老年组（61～80岁）分布最多,占比从45.7%到60.9%不等;而对于黑曲霉,中年组（41～60岁）分布最多见,比例为41.1%。结论:本研究阐明了中国北方多中心临床分离丝状真菌的大样本流行病学趋势,详细比较了质谱鉴定、分子鉴定对常见、少见及罕见临床丝状真菌的应用效能,对本研究发现代表菌株进行形态学观察,分析了多家医院丝状真菌鉴定能力现状,为我国临床侵袭性真菌病监测及真菌实验室能力提升提供了一定的数据支撑。