诱导幼猴睾丸精子形成的研究

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精子发生起始于生精干细胞的分化,终止于成熟精子的形成。精子形成是一种由多重基因控制,受下丘脑-垂体-睾丸性腺轴生殖内分泌调控,依赖生精组织结构和功能的完备同时也受到自身分泌的各种细胞因子的调控,涉及细胞增殖、减数分裂、细胞分化等一系列复杂的动态过程。近年来随着研究的深入,已经明确的参与精子发生的基因就有3000多个,可见这一生理过程的复杂性。虽然人们对它的认识有所增加,但仍然远远没有了解透彻。本论文目基于下丘脑-垂体-睾丸性腺轴控制性腺发育的理论基础,利用生殖激素诱导幼年雄性猴睾丸或睾丸组织提早发育和精子发生,获得幼年猴精子并繁殖其后代,以此缩短灵长类动物世代周期,加速繁殖后代,不仅为睾丸发育和精子成熟建立研究模型,更重要为转基因猴的快繁提供思路。因此,本论文借助睾丸异种移植、睾丸组织体外培养和诱导雄性性早熟这三种方法诱导幼猴睾丸精子发生过程,以期获得成熟精子并通过辅助生殖技术产生子代。(1)选取3月龄内幼猴睾丸组织进行异种移植,实施19只裸鼠背部皮下移植,随机分为FSH组(每天注射FSH 1 IU)和对照组,FSH组曲细精管增粗幅度优于对照组。裸鼠移植11个月后曲细精管中有疑似精细胞出现。(2)选取采用3月龄内幼猴睾丸组织进行体外培养,体外培养的睾丸组织随机分为三组:FSH组(培养液中添加5 IU/mLFSH)、睾酮组(培养液中添加50 ng/m L睾酮)和对照组(未添加外源激素),结果发现添加FSH、睾酮后曲细精管的发育进程加快,培养4个月后部分曲细精管中能观察到疑似精细胞出现。(3)选取两只1.9~2岁且尚未有任何性成熟症状的小公猴,每天每只注射GnRH60μg,将其溶解在生理盐水中,分为六等份,每隔3小时给予幼年猴肌肉注射。激素诱导的幼猴性成熟为真性性早熟,4个月后通过阴茎电刺激能够获得成熟的精子,通过单精子注射,获得受精胚胎,且发育至囊胚。本研究首次成功诱导幼龄食蟹猴性早熟,并获得其精子和胚胎。添加FSH和睾酮可促进异体或体外培养幼龄猴睾丸组织曲细精管发育。
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