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目的:通过建立大鼠糖尿病动物模型,观察糖尿病时牙周组织中VEGF及IL-6的改变及病理变化,探讨滋阴活血方剂防治作用,为临床中药防治糖尿病牙周炎提供理论依据。
方法:选用6月龄雄性Wistar大鼠36只,随机分为4组:正常组(8只)、糖尿病组(10只)、糖尿病滋阴活血方剂治疗组(中药组)(9只)、糖尿病尿酸盐治疗组(西药组)(9只)。糖尿病组、中药组、西药组腹腔注射STZ溶液(按45mg/kg注射),制备糖尿病模型。正常组腹腔注射生理盐水(按45mg/kg注射)。注射后三天尾尖采血测空腹血糖,用代谢笼收集12小时尿液测定尿糖,确定造模成功。自建立糖尿病模型第1天起,中药组每只大鼠3ml/天(含生药1g/ml)中药灌喂;西药组尿酸盐(Urate)溶液灌喂,每只大鼠20ml/天(Urate用量160mg/kg/天);正常组和糖尿病组自由饮水。持续喂养3个月。在3个月时再检测血糖、尿糖、体重一次。并将全部动物股动脉放血处死,迅速分离上颌骨,置于lO%多聚甲醛缓冲溶液中固定,EDTA脱钙,制作牙周组织切片,进行HE染色,光镜观察;行IL-6、VEGF免疫组织化学染色,观察IL-6、VEGF表达并作统计学分析。
结果:
1糖尿病动物模型的建立;
腹腔注射STZ后第三天进行空腹血糖检测,并用代谢笼收集12小时尿液。注射STZ大鼠空腹血糖均高于15mmol/L,尿糖+++以上,造模成功。3个月后处死动物前,测量动物空腹血糖及体重,糖尿病组、西药组血糖明显高于正常组和中药组(P<0.01),糖尿病组与西药组血糖无明显差异(P>0.05);西药组血糖高于中药组(P<0.05);中药组血糖高于正常组(P<0.01)。糖尿病组、中药组、西药组体重明显低予正常组(P<0.01);糖尿病组、中药组、西药组三组间无明显差异(P>0.05)。 2大鼠牙周组织形态学观察正常组:结合上皮附着于釉牙骨质界,与牙体组织结合牢固,沟内上皮无炎细胞浸润;牙龈纤维及牙周膜韧带纤维排列有序、整齐;牙槽嵴项无吸收。
糖尿病组:结合上皮附着于釉牙骨质界,牙龈上皮及固有层内有大量炎细胞浸润;胶原纤维排列紊乱,牙龈、牙周膜毛细血管数目增多、管腔扩张充血;深部固有牙槽骨、牙槽嵴项可见破骨细胞。
中药组:结合上皮附着于釉牙骨质界,牙龈上皮及固有层内有少量炎细胞浸润;牙龈纤维及牙周膜韧带纤维排列有序、整齐;固有牙槽骨可见少量破骨细胞。
西药组:与中药组表现相似。
3免疫组化观察3.1牙周组织中VEGF的表达正常组:牙周组织VEGF表达较弱。牙龈表面上皮棘层、粒层及表层细胞弱阳性表达,基底细胞阴性表达,牙周膜成纤维细胞弱阳性表达,骨髓腔基质细胞阳性表达散在分布。
糖尿病组:牙周组织VEGF表达较强。牙龈表面上皮棘层、粒层及表层细胞阳性表达,基底细胞阴性表达,牙周膜成纤维细胞阳性表达,骨髓腔基质细胞强阳性表达散在分布。中药组:牙龈表面上皮棘层、粒层、表层细胞弱阳性表达,基底细胞阴性表达,牙周膜成纤维细胞弱阳性表达,骨髓腔基质细胞阳性表达散在分布。
西药组:与中药组表达相似。
3.2牙周组织中IL-6的表达正常组:牙龈表面上皮棘层、粒层、表层细胞弱阳性表达,牙周膜成纤维细胞弱阳性表达,骨髓腔基质细胞阳性表达散在分布。
糖尿病组:牙龈表面上皮棘层、粒层、表层细胞阳性表达,牙周膜成纤维细胞阳性表达,骨髓腔基质细胞强阳性表达散在分布。
中药组:牙龈表面上皮棘层、粒层、表层细胞弱阳性表达,牙周膜成纤维细胞弱阳性表达,骨髓腔基质细胞阳性表达散在分布。
西药组:牙龈表面上皮棘层、粒层、表层细胞弱阳性表达,牙周膜成纤维细胞弱阳性表达,骨髓腔基质细胞阳性表达散在分布。
4半定量分析结果VEGF免疫组化平均光密度值(OD)糖尿病组低于正常组、中药组、西药组(P<0.01);正常组与西药组、中药组无明显差异(P>0.05);西药组与中药组无明显差异(P>0.05)。
IL-6免疫组化平均光密度值(OD)糖尿病组低于中药组(P<0.05)、低于正常组与西药组(P<0.01);中药组低于西药组(P<0.05);正常组与中药组无明显差异(P>0.05);正常组与西药组无明显差异(P>0.05)。结论:1.通过腹腔注射STZ建立了大鼠糖尿病模型。2.糖尿病大鼠牙周组织中VEGF及IL-6表达增强,组织形态结构发生改变,降低了牙周组织抵抗、防御细菌侵袭的能力。这种亚临床病理改变,可能是糖尿病病人易发生牙周炎、加重牙周炎发展的因素之一。3.滋阴活血方剂与尿酸盐均可使牙周组织中VEGF和IL-6表达趋于正常,使牙周组织形态结构的改变得以恢复。4.滋阴活血方剂可用于糖尿病牙周炎的防治。