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目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)促进成年大鼠海马结构神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化的影响及EGF浓度为20ng/mL时,BDNF促进成年大鼠海马结构神经干细胞向神经元分化的最佳浓度。材料和方法用含碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、EGF、B27的DMEM/F12体外培养成年大鼠海马结构神经干细胞,并进行传代培养。当第4代细胞大多数克隆球直径约为2μm时,利用有限稀释法进行单细胞克隆培养。单细胞克隆培养形成的克隆球直径约2μm时进行传代培养,进行以下2组实验:1、神经干细胞的鉴定部分克隆球行巢蛋白(Nestin)免疫细胞化学染色;部分克隆球用含10%胎牛血清的DMEM/F12进行诱导分化,1w后分别行神经元特异性烯醇化酶(neuronespecific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫细胞化学染色;2、将单细胞克隆再传代而来的神经干细胞分为2部分进行诱导分化实验(1)根据培养液中BDNF浓度的不同将细胞分为5组,0ng/mL组、50ng/mL组、100ng/mL组、150ng/mL组和200ng/mL组,0ng/mL组所用培养液为含10%胎牛血清、20ng/mLEGF的DMEM/F12,其它各组所用的培养液在0ng/mL组的基础上加入相应浓度的BDNF。(2)按培养液中添加诱导因素的不同分为对照组、EGF组、BDNF组和EGF+BDNF组进行诱导分化培养,对照组的培养液为含10%胎牛血清的DMEM/F12,另外3组的培养液在对照组所用培养液的基础上分别加入EGF、BDNF、EGF+BDNF,其中EGF浓度为20ng/mL,BDNF浓度为50ng/mL。上述2部分细胞接种于六孔板中,每组6孔,培养1w行NSE免疫细胞化学染色,计数阳性细胞比例后进行统计学分析。实验结果1、神经干细胞的鉴定结果单细胞克隆培养形成的克隆球表达Nestin,诱导分化1w后细胞表达NSE、GFAP。2、诱导因素对神经干细胞分化影响的结果(1)0ng/mL组、50ng/mL组、100ng/mL组、150ng/mL组和200ng/mL组大鼠海马结构神经干细胞向神经元分化的比例分别为13.33±3.44%、23.17±2.93%、20.67±2.80%、16.67±2.73%、14.17±3.43%,经t检验发现,50ng/mL组、100ng/mL组神经干细胞分化为神经元的比例明显增高(P＜0.05)。(2)对照组、EGF组、BDNF组、EGF+BDNF组细胞分化为神经元的比例分别为17.67±3.27、13.33±3.44、19.67±2.07、23.17±2.93,经过t检验发现:BDNF组神经干细胞分化为神经元的比例明显高于对照组和EGF组,EGF+BDNF组神经干细胞分化为神经元的比例明显高于BDNF组(P＜0.05)。结论1、EGF可以提高BDNF促进成年大鼠海马结构神经干细胞向神经元分化的比例。2、EGF浓度为20ng/mL时,BDNF促进成年大鼠海马结构神经干细胞向神经元分化的最佳浓度为50ng/mL。