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背景:在乳腺癌治疗过程中,由于常规化疗药物的毒副作用较大,小分子抑制剂的靶向治疗在临床上越来越受到重视。然而目前临床上用于治疗乳腺癌的靶向药物较少,特别是针对三阴性性乳腺癌的靶向药物目前几乎没有,因而三阴性乳腺癌的治疗仍是一个挑战。近年来Bromodomain和Extraterminalmotif(BET)家族蛋白的抑制剂在三阴性乳腺癌中显示出很强的抗肿瘤活性,有望成为三阴性乳腺癌的靶向药物。然而在BET蛋白抑制治疗三阴性乳腺癌的临床试验中已有其耐药的报道出现,但其具体机制尚未得到证实。肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境的重要组成部分,大量研究显示肿瘤周围巨噬细胞有促肿瘤的作用,一方面可以促进血管生成、介导免疫逃逸,也参与肿瘤的增殖和转移,而另一方面也与肿瘤细胞对化疗和靶向治疗的抵抗有关,文献报道也与三阴性乳腺癌的预后不良有关。目前,肿瘤相关巨噬细胞是否与三阴性乳腺癌中BET抑制剂耐药相关以及具体耐药的机制都不清楚。本实验分两部分:第一部分研究BET抑制剂治疗三阴性乳腺癌的抗肿瘤作用机制,第二部分重点研究肿瘤相关巨噬细胞促进BET抑制剂的在三阴性乳腺癌中耐药的机制。
目的:通过细胞实验和动物模型来研究肿瘤相关巨噬细胞是否参与BET抑制的耐药以及耐药的具体机制。
方法:选择两种不同的BET抑制剂作用于三阴性乳腺癌细胞系,采用CCK-8和Annexin-V-FITC/PI双重染色法检测细胞活力和凋亡;采用Westernblot和免疫荧光法检测蛋白水平;通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达;采用双荧光素酶报告法检测NF-κB活性;采用聚合酶链反应(PCR)array技术检测NF-κB胞质中上游信号分子的mRNA水平;通过裸鼠异种移植肿瘤实验分析体内肿瘤对药物的敏感性以及巨噬细胞促进肿瘤耐药的情况;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测条件培养液中IL-6和IL-10的水平。
结果:研究发现BET抑制剂JQ1和I-BET151通过抑制NF-κB信号传导抑制三阴性乳腺癌细胞生长和诱导细胞凋亡;机制分析则提示BET抑制通过降低IKBKE的表达减弱三阴性乳腺癌中NF-κB的信号转导。而肿瘤相关巨噬细胞是通过上调三阴性乳腺癌中的IKBKE表达来激活激活NF-κB信号,从而增强乳腺癌细胞对BET抑制剂的抵抗力。进一步在动物模型中也验证了巨噬细胞确实参与了BET抑制剂的耐药且与STAT3信号激活相关,最后研究表明肿瘤相关巨噬细胞诱导三阴性乳腺癌细胞IKBKE表达与肿瘤相关巨噬细胞分泌IL-6和IL-10激活的STAT3信号有关。
结论:BET蛋白抑制剂在三阴性乳腺癌的治疗中是通过衰减IKBKE/NF-κB信号通路从而抑制细胞活力诱发肿瘤凋亡的,而三阴性乳腺癌激活的巨噬细胞通过IL-6或IL-10/STAT3/IKBKE/NF-κB轴赋予三阴性乳腺癌细胞抗BET抑制的能力,BET抑制剂和STAT3抑制剂联合应用对肿瘤相关巨噬细胞或肿瘤相关巨噬细胞条件培养液处理的三阴性乳腺癌细胞在体内外都具有协同抑制作用。我们的结果表明:阻断IKBKE的表达,或双重抑制BET和STAT3可能是未来治疗三阴性乳腺癌的新策略。
目的:通过细胞实验和动物模型来研究肿瘤相关巨噬细胞是否参与BET抑制的耐药以及耐药的具体机制。
方法:选择两种不同的BET抑制剂作用于三阴性乳腺癌细胞系,采用CCK-8和Annexin-V-FITC/PI双重染色法检测细胞活力和凋亡;采用Westernblot和免疫荧光法检测蛋白水平;通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达;采用双荧光素酶报告法检测NF-κB活性;采用聚合酶链反应(PCR)array技术检测NF-κB胞质中上游信号分子的mRNA水平;通过裸鼠异种移植肿瘤实验分析体内肿瘤对药物的敏感性以及巨噬细胞促进肿瘤耐药的情况;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测条件培养液中IL-6和IL-10的水平。
结果:研究发现BET抑制剂JQ1和I-BET151通过抑制NF-κB信号传导抑制三阴性乳腺癌细胞生长和诱导细胞凋亡;机制分析则提示BET抑制通过降低IKBKE的表达减弱三阴性乳腺癌中NF-κB的信号转导。而肿瘤相关巨噬细胞是通过上调三阴性乳腺癌中的IKBKE表达来激活激活NF-κB信号,从而增强乳腺癌细胞对BET抑制剂的抵抗力。进一步在动物模型中也验证了巨噬细胞确实参与了BET抑制剂的耐药且与STAT3信号激活相关,最后研究表明肿瘤相关巨噬细胞诱导三阴性乳腺癌细胞IKBKE表达与肿瘤相关巨噬细胞分泌IL-6和IL-10激活的STAT3信号有关。
结论:BET蛋白抑制剂在三阴性乳腺癌的治疗中是通过衰减IKBKE/NF-κB信号通路从而抑制细胞活力诱发肿瘤凋亡的,而三阴性乳腺癌激活的巨噬细胞通过IL-6或IL-10/STAT3/IKBKE/NF-κB轴赋予三阴性乳腺癌细胞抗BET抑制的能力,BET抑制剂和STAT3抑制剂联合应用对肿瘤相关巨噬细胞或肿瘤相关巨噬细胞条件培养液处理的三阴性乳腺癌细胞在体内外都具有协同抑制作用。我们的结果表明:阻断IKBKE的表达,或双重抑制BET和STAT3可能是未来治疗三阴性乳腺癌的新策略。